亚硫酸氢盐测序法检测小鼠胚胎Oct4启动子区甲基化

应用亚硫酸氢盐测序技术,以昆明小白鼠几种不同时期体内胚为研究对象,对其单拷贝基因Oct4启动子区进行甲基化检测.基因组经低熔点琼脂糖包埋、亚硫酸氢盐修饰后,运用巢式PCR对处理后的DNA进行两轮扩增,扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳检测和单克隆测序进行分析.结果表明,亚硫酸氢盐测序法是一项敏感而有效的DNA甲基化检测手段.     

不同剂量PMSG对夏季波杂山羊诱导发情效果的影响

采用炔诺酮阴道栓结合孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素的诱导发情方案对江淮地区波杂山羊进行夏季诱导发情处理,比较了不同剂量孕马血清促性腺激素诱导波杂山羊的发情效果,测定了处理羊外周血液雌二醇和孕酮浓度的变化规律。结果表明,每千克体重肌肉注射5IU和8IU孕马血清促性腺激素时波杂山羊的诱导发情率为100%,显著高于10、12、15IU/kg剂量组的72.22%、71.43%和77.78%,(P<0.05);不同剂量孕马血清促性腺激素诱导发情羊的受胎率差异不显著(P>0.05),孕马血清促性腺激素剂量为8IU/kg时发情羊的受胎率最高(68.75%);处理羊外周血液雌二醇浓度在发情日达到峰值(119.85pg/mL±1.63pg/mL);孕酮在植栓第10天浓度比较高(0.69ng/mL±0.18ng/mL),显著高于对照组的基础水平,撤栓后在发情配种时浓度降低,且低于对照组的基础水平。     

猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活参数研究

本研究比较了按不同方法贮藏的培养液对猪卵母细胞体外成熟及成熟后孤雌激活对胚胎发育的影响。此外,还探索了针对初情期前母猪体外成熟卵母细胞和孤雌激活方案。结果如下：①1.4 kv/cm、100 μs、1DC电激活后,卵母细胞死亡率明显高于2.0 kv/cm、30 μs、1DC和2.0 kv/cm、60 μs、1DC处理组,但激活后胚胎卵裂率和囊胚率相似;②使用钙离子载体和6-二甲基氨基嘌呤（Ionomycin+6-DMAP）处理后,胚胎卵裂及囊胚率都明显不如电激活处理;③6次独立试验结果证明：经4℃冷藏和-20℃冷冻保存的培养液用于猪卵母细胞培养,其体外成熟率、孤雌激活后的卵裂率及囊胚发育率无显著差异（P＞0.05）。说明成熟卵在2.0 kv/cm、30 μs、1DC或者 2.0 kv/cm、60 μs、1DC电击参数激活下可以降低死卵率;按本试验设计的电激活方案处理初情期前母猪成熟卵优于化学激活;在-20℃冷冻保存猪卵母细胞成熟液是可行的。      

干细胞因子对小鼠附植前胚胎体外发育的影响

为优化胚胎体外培养体系,提高胚胎体外培养发育率和发育质量,以昆明小鼠体内受精胚、体外受精胚和孤雌激活胚为研究对象,研究不同浓度干细胞因子对小鼠不同来源胚胎体外发育的影响。结果表明:在KSOM培养液中,小鼠自然受精胚、体外受精胚和孤雌激活胚的卵裂率和桑椹胚率均无显著差异(P0.05),但IVN胚和IVF胚的囊胚发育率及囊胚细胞总数显著高于孤雌激活胚;培养液中添加不同浓度的干细胞因子对小鼠自然受精胚和孤雌激活胚的卵裂率、桑椹胚率、囊胚发育率和囊胚细胞总数都没有显著的影响(P0.05),但干细胞因子浓度为100ng·mL-1时,小鼠体外受精胚的桑椹胚率和囊胚发育率显著高于对照(P0.05)。