抗菌肽分泌型载体的构建及转基因马铃薯中蛋白的胞外分泌

马铃薯青枯病是一种维管束病害。为使抗菌肽分泌到细胞外以提高抗菌能力，将抗菌肽ｍ Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ或Ｓｈｉｖａ Ａ基因分别和大麦（淀粉酶的信号肽序列连接后，克隆到经改造的植物表达载体ｐＢＩ１２１中，构建成分泌型表达载体。经冻融法转入根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４，叶盘法转化马铃薯栽培品种米拉，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明外源基因已整合到马铃薯基因组中。用透射电镜观察到加接信号肽序列的转基因植株茎、叶的细胞     

转Xa21基因杂交水稻选育和评价

通过基因枪转基因方法和双质粒共转化体系将Xa21基因转入优良恢复系明恢63,得到转基因系M12和M22,并进一步做田间试验、新品种选育和食用安全性评价。结果显示:M12和M22对中国的所有白叶枯病小种都表现出高度抗性,但与原受体品种明恢63相比,农艺性状上有许多变异,主要表现在:结实率、千粒重等农艺性状变差,与珍汕97A的配合力显著降低;但与温敏不育系(X07S、056S)配组的F1有较好的田间表现。通过多代回交和分子标记辅助选择,成功地将Xa21基因从M12株系转到保持系80-4B和不育系80-4A中,得到抗白叶枯病的皖21B和皖21A。并利用皖21A不育系选育出优良杂交组合抗优97(皖21A×R-18),该组合在两年区域试验和一年生产试验中产量表现突出,米质优良。对不同世代和不同遗传背景的转基因品系进行白叶枯病鉴定和Southern分析表明:Xa21基因都能稳定遗传和正常表达,连续16代的种植并没使其白叶枯病的抗性减弱或丧失,而且不论Xa21基因是纯合的还是杂合的都有相同的抗性表现。对大鼠和小鼠的饲喂试验表明:转基因大米实质上等同于非转基因大米,是安全无害的。     

花粉管通道法介导的棉花遗传转化

花粉管通道法介导的遗传转化是一种借助于植物自身的种质细胞卵细胞或受精卵为转化对象的直接转化技术。作为一种颇具特色的转基因技术,由于具备无基因型限制和易于实现大规模基因转化的特点,可以在任何开花植物和不同物种之间实现基因的转移,使得受体物种在获得新的基因型的同时,也获得转基因所表达的新的表型性状,由此成为为农作物转基因育种的崭新技术途径。利用花粉管通道法,成功地进行了棉花的抗虫／抗病的基因工程,获得了多种实用化的抗虫／抗病转基因棉花新品种(系),进入了棉花大面积生产。     

分泌抗马铃薯Y病毒株系特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

杂交瘤技术和单克隆抗体是国际上自七十外年代中期发展起来的一项生物工程新技术。关于植物病毒单克隆抗体研究的报道只是近二、三年的事,国内尚无建立分泌植物病毒株系特异     

花生小叶外植体植株再生及农杆菌介导的基因遗传转化

鄂花四号、中花四号和豫花一号萌动４ｄ的小叶作外植体，通过器官再生在ＭＳ培养基加３ｍｇ／ＬＢＡＰ和１ｍｇ／ＬＮＡＡ上诱导芽分化，转至ＭＳ加５ｍｇ／ＬＢＡＰ上诱导芽伸长，再生植株。芽诱导率为８６％～１００％，每个外植体平均再生５个植株。在培养基中加入１ｍｇ／ＬＡｇＮＯ３和５００ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素能有效抑制愈伤褐化和死亡，并能提高植株再生率。萌动４ｄ的小叶与农杆菌ＡＧＬ１分别共培养２ｄ，通过在再生培养基中加卡那霉素筛选，获得转基因再生植株，转基因植株生根后，移栽网室生长，并已开花结荚。外源基因的表达通过卡那霉素抗性和Ｇｕｓ活性组织化学检测得到证实。     

抗菌肽基因导入桑树获得抗病转基因植株

用携带抗菌肽基因的农杆菌处理桑子叶,在含有羧苄青霉素（Cb）400～500mg／L和卡那霉素（Km）20mg／L的MS培养基上,有32.4％的子叶产生了不定芽;66.5％的不定芽在含有Cb300mg／L和Km30～40mg／L的培养基中,正常生长成2～3cm高的新稍;新梢在含Cb50mg／L和Km10mg／L的生根培养基中有72．6％形成完整根系。3次转化共获得12个株系55株KmR植株。不同株系桑苗叶片DNA点杂交分析显示,7个株系有阳性杂交信号。KmR株系桑苗的抗病性测定显示,5个株系共14株桑苗对青枯病具有较强抗性.     

结球甘蓝叶肉原生质体培养再生植株

用酶法从结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata)F_1代杂种‘报春’的第一真叶分离原生质体,培养在修改的DPD液体培养基(CaCl_(2)·2H_(2)O800毫克/升,补加2,4-D0.5毫克/升、激动素KT1毫克/升、甘露醇0.3M、蔗糖20克/升)中,获得了持续的细胞分裂和体细胞胚胎发生。细胞团转至修改的MS固体培养基上诱导出愈伤组织。愈伤组织转至MS加KT 3毫克/升、赤霉酸GA_(3)0.1毫克/升的分化培养基上后,分化出了大量丛生芽。分化的芽在MS加吲哚乙酸(IAA)、KT、 GA_(3)各0.1毫克/升、并补加N.Z.amine 500毫克/升的培养基上,形成了植株。     

RNA沉默及其在基因功能研究中的应用

摘要: RNA沉默现象普遍存在于真核生物中，近年来对其作用机理的研究取得了很大的进展，发现并鉴定了一些参与该过程的蛋白和核酸分子。RNA沉默能够抵御病毒和转座子对基因组中重要基因的破坏。RNA沉默技术已经成为功能基因组学研究的重要手段之一。     

转几丁质酶和 β-1,3-葡聚糖酶基因提高棉花对枯萎病和黄萎病的抗性

 枯、黄萎病是世界棉花生产中的两大重要病害。传统育种缺乏抗源，几丁质酶和 -1,3-葡聚糖酶是植物防御体系中的两种防卫因子，两者之间存在协同增效作用。据此构建了4个单价和2个双价基因(分别定位于细胞内或细胞外)的植物表达载体，通过花粉管通道法转化棉花，经PCR和Southern杂交检测以及1996 2000年温室及病圃多代筛选鉴定，已培育出对枯、黄萎病抗性提高的转基因棉花株系。将抗病基因导入国产抗虫棉品种GK19中，还获得了兼抗病、虫的转基因优系。     

日本植物细胞工程的研究与应用

1985年9月,我们考察了日本植物细胞工程的研究进展和应用情况。 日本农林水产省对生物技术在农业上的应用十分重视,为加强研究和开发,制订了相应的5年规划,合并、调整和新建了研究机构,如农业生物资源和农业环境技术两个研究所。在原有研究机构内,也增加了生物技术的比重,如食品综合研究所中,有很大一部分力量正从事基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程的研究,蔬菜研究所中生物