冷藏大黄鱼SSO希瓦氏菌致腐能力差异机制初探

为探讨特定腐败菌(SSO)希瓦氏菌(Shewanella)致腐能力的差异机制,采用生化和16S rDNA鉴定冷藏大黄鱼货架期终点的产H2S菌,在灭菌鱼汁和无菌鱼块筛选4株致腐差异的希瓦氏菌,扩增氧化三甲胺(TMAO)还原酶基因及分析其表达量,并预测其蛋白质的理化性质。结果显示,22株产H2S菌均为希瓦氏菌属,其中 S.baltica占54.5%,为S. putrefaciens占40.9%,S. hafniensis占4.5%。希瓦氏菌在灭菌鱼汁中致腐能力存在显著差异,其中S. balticaXH2和XH8的缺点评分和TVB-N最高,S. putrefaciensXH14和XH17菌最低。接种无菌鱼块的4株希瓦氏菌中XH2的样品在72h出现腐败气味,48h细菌高于107cfu/g,产生较高的TMA、TVB-N、尸胺和腐胺和,XH8菌次之,XH14和XH17菌最慢。四株希瓦氏菌都扩增出2490bp的torA基因,且torA基因的表达量与致腐能力密切相关,S.balticaXH2最高。预测的TorA蛋白中S.balticaXH2的分子量和不稳定指数最大,理论等电点和总平均疏水性最小。可见,S. baltica XH2为冷藏大黄鱼的SSO,其强致腐能力与torA基因高表达量和TorA蛋白理化性质有关。研究为阐明希瓦氏菌致腐机制奠定了良好的基础。     

香菇中γ-谷氨酰转肽酶的分离纯化及其酶学性质研究

通过(NH4)2SO4沉淀、Phenyl Sepharose FF疏水层析分离纯化香菇中的γ-谷氨酰转肽酶(γ-Glutamyltranspeptidase,GGT),纯化后的GGT的比活力到达了19.59 U/mg.SDS-PAGE分析表明,GGT由分子量分别为28 kDa和60 kDa的两个亚基组成.酶学性质试验结果表明,GGT反应的最适温度为37 ℃,最适pH 值为7.6;金属离子Na+、K+和Ca2+对酶有激活作用,而Ag+、Cu2+、Zn2+和Fe3+则有抑制作用;试验范围内,GGT水解γ-glutamyl-p-nitroanilide的米氏动力学参数Km 值为2.601 μmol/mL,Vmax值为0.0287 μmol/min;组成的氨基酸中,Glu和Asp含量较高,Met和Cys含量较低.     

番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达

参考已发表的番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, mDRV)的S4序列，自行设计1对扩增σC基因的引物，对mDRV ZJ99株的RNA抽提物进行RT-PCR扩增，成功地获得了843 bp特异性的扩增片段(GenBank: AY619690)。将PCR产物克隆测序，BLASTn比较结果显示, mDRV ZJ99株σC基因与福建MW9710株对应基因的同源性为98％，与法国89026和89330株对应基因的同源性分别为92％和93%； BLASTp比较结果显示, ZJ99株编码的σC蛋白与MW9710、89026和89330株相应蛋白分别具有94％、89％、 89％同一性(identity)和95％、92％、93％相似性(similarity)。进一步将σC基因亚克隆至原核表达载体pET28a， 转化大肠杆菌(Escherichia coli )BL21(DE3)，IPTG诱导阳性重组子，SDS-PAGE电泳检测发现, σC蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式高效表达，目的蛋白的表达量可达到细菌总蛋白的22.9％。     

蒙脱石对水相中沼泽红假单胞菌的吸附研究

通过测定吸附条件对吸附率及吸附菌量的影响,研究了蒙脱石对水相中沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）的吸附特性。结果表明,当蒙脱石重量为0．5g时,吸附菌量和吸附百分率均达到较恒定的状态,且受到菌液起始浓度和体积的影响。不同pH条件下,蒙脱石对菌的吸附率随着pH值的升高而逐渐降低,当pH=9时,有效吸附率为72．67％。蒙脱石对菌的吸附率与离子强度成反比。不同温度条件下,蒙脱石对菌的吸附率呈现出先升高、后降低的趋势,温度30℃时吸附率最高,为86．55％。表明蒙脱石对水相中菌的吸附不仅依赖于生物体的化学属性和表面属性,也受到环境温度等条件的影响。     

犬瘟热病毒Guizhou株血凝素基因的克隆及序列分析

参照已发表的文献合成1对引物，以犬瘟热病毒Guizhou分离株感染Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板，RT-PCR扩增获得血凝素蛋白基因（H）901～1661位大小为761bp的片段，并将PCR扩增产物进行克隆和测序。将Guizhou株与GenBank数据库中的31株CDV及国内NanjingOP株的H基因序列进行同源性和系统发生树分析，发现Guizhou株的H基因部分序列与疫苗毒株Convac和Onderstpoort的同源性最低，只有90％；与日本野毒株Tanu96、KDK-1、Hmanatsu、Yanaka、UENO的同源性较高，为96％～98％；且与国内从大熊猫和小熊猫分离的野毒株GP和LP的同源性也较高，为98％和96％。系统发生树分析显示，Guizhou株与国内野毒株GP和LP，及日本的5个野毒株应属同一类，其中和GP株基因型最近，推测这些毒株间有更近的共同祖先。因此怀疑该病毒较适应于野生动物，且在我国某些地区的野生动物中可能存在自然疫源性传播。     

茶多酚处理对冷藏养殖大黄鱼品质的影响

研究了经过0.2%茶多酚浸泡的养殖大黄鱼和对照组在4℃冷藏条件下25d内品质的变化。定期分析了处理组和对照组大黄鱼样品的感官特征、微生物指标（菌落总数）和化学指标（pH、TVB-N、K值）。结果表明,在冷藏过程中茶多酚处理能延长大黄鱼货架期7~8d,在货架期终点15d时,茶多酚处理组和对照组样品的细菌总数分别为10^6.12CFU/g和10^7.45CFU/g,pH值分别为6.78和6.84,TBA值分别为0.122mg/kg和0.168mg/kg,TVB-N分别为166.6mg/kg和318.7mg/kg,K值分别为27.10%和43.72%。可见,茶多酚在大黄鱼冷藏保鲜过程中能有效地抑制细菌繁殖,并减缓脂肪氧化,从而延长了大黄鱼的货架期。     

水产品中4种常见致病菌多重PCR检测方法的建立及评价

根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因nuc、沙门氏菌的侵袭蛋白基因invA、志贺氏菌的侵染性质粒抗原H基因ipaH和副溶血性弧菌的毒力表达调控基因toxR设计引物,建立一种快速检测水产品中上述4种常见食源性致病菌的多重PCR方法。结果显示,沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌及副溶血性弧菌的多重PCR扩增片段产物大小分别为549、426、348和243 bp,该检测方法具有良好的特异性和灵敏度。设计优化了可用于水产样品中4种目标致病菌的共增菌培养基,该方法应用于35份实际水产样品的检测,并与国标方法对比验证,4种致病菌的整体符合率达94%以上,两种检测方法无显著性差异(P>0.05)。可见,该多重PCR方法可应用于水产品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌及志贺氏菌4种食源性致病菌的快速检测和分子流行病学调查。     

真空、空气和气调包装对冷藏鱼糜制品品质的影响

为研究真空、空气和气调3种不同包装方式对冷藏鱼糜制品品质的影响,以鱼糜制品中的鱼丸为对象,通过测定鱼丸在(3±0.5) ℃冷藏期间微生物的种类和数量、理化指标和感官指标的变化情况,评价真空包装(vacuum packaging,VP)、空气包装(Air)、气调包装(M1,50%CO₂+50%N₂;M2,75%CO₂+25%N₂)对鱼丸品质的影响。结果表明,空气包装和真空包装鱼丸中的优势腐败菌是微球菌属、明亮发光杆菌和乳酸菌属,其次是假单胞菌和酵母菌。75%CO₂+25%N₂和50%CO₂+50%N₂的气调包装鱼丸中主要的优势腐败菌是明亮发光杆菌和乳酸菌属,其次是微球菌属。与空气包装和真空包装相比,75%CO₂+25%N₂和50%CO₂+50%N₂的气调包装完全抑制了酵母菌、假单胞菌的生长。75%CO₂+25%N₂和50%CO₂+50%N₂的气调包装比真空包装和空气包装更有利于抑制鱼丸中微生物的生长和TVB-N值的增加,保持pH、白度和感官品质的稳定,延长鱼丸的货架期。在(3±0.5) ℃冷藏条件下不同包装对鱼丸品质的保持效果好坏依次为M2,75%CO₂+25%N₂＞M1,50%CO₂+50%N₂＞VP＞Air,其对应的货架期分别为49、42、21和14 d。     

饲用奶香和焦糖香味剂主要致香成分的分析

采用固相微萃取-气相色谱-质谱(SPME-GC-MS)联用法对奶香型和焦糖香型饲料香味剂的致香成分进行分析.结果表明:2种香味剂的各种致香成分分离效果良好;奶香型香味剂主要致香成分为丙位壬内酯、丙位辛内酯和乙基香兰素,苯甲醇为定香剂;焦糖香型香味剂主要致香成分为乙基麦芽酚.     

食品微生物检验实验教学改革的初步探索

食品微生物检验及实验教学在食品质量与安全专业教学体系中是核心课程。针对传统实验教学的现状,重点阐述通过优化和整合实验教学,实施模块式教学体系,让学生充分参与实验教学始终、提高实验教学队伍水平、改革实验考核方法,进行了食品微生物检验实验教学改革探索。实践证明,该教学方法调动了大学生学习的能动性,提高了实验教学效果。