“新发现动物疫病综合信息系统”的建立

一目前我国动物防疫形势 1 动物疫病和药物残留已成为阻碍我国养殖业健康发展的重要因素 在过去20年间我国的肉类增加了4倍多，从1980年的1450万吨猛增到2000年的6270万吨，从占世界总产量的10．6％跃升到279％，成为肉类第一生产大国。然而我国猪、牛、羊、禽等的死亡率高出发达国家1倍以上。权威机构估计我国每年因畜禽死亡造成的损失为260～300亿元，另外由于疫病引起的生产性能下降、兽医卫生和其他损失约700亿元。     

鸡痘病毒282E4株Bam HI部分片段的重组载体质粒构建与序列分析

在中国鸡痘病毒２８２Ｅ４弱毒株基因组部分ＢａｍＨＩ片段的质粒ｐＵＢ、ｐＵＣ、ｐＵＤ、ｐＵＤ２、ｐＵＥ和ｐＵＦ酶切分析的基础上,对ｐＵＦ进行了亚克隆获得ｐＵＦ－Ｅ和ｐＫＳ－Ｘ,对最可能存在非必需区的ｐＵＥ质粒进行了序列分析,改造了含Ｐ１１Ｐ７．５－ＬａｃＺ报告基因盒,并在上述质粒的相应单一酶切位点插入Ｐ１１Ｐ７．５－ＬａｃＺ报告基因盒,构建成ｐＵＢ１、ｐＵＦＣ１、ｐＵＦＥ１、ｐＵＦ－Ｅ１和ｐＫＳＦ－Ｘ１５个重组载体质粒。体内重组等工作正在进行中。     

2001年英国口蹄疫流行回顾

20 0 1年 2月 ,英国结束了自 196 8年以来 33年无大规模口蹄疫 (FMD)流行的历史 ,发生了全国性的口蹄疫大流行 ,使 1/8的家畜被杀 ,给农业、旅游和乡村度假业以及其他相关行业的发展造成了严重影响 ,英国的大选也不得不因此而延期。同时 ,疫情还波及到法国、荷兰和爱尔兰 ,造成     

O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的构建及原核表达

首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP1基因的3个抗原袁位，与另外扩增的流行毒株VP1基因末端273bp片段相连,构建出O型VP1嵌合基因片段（VP1O）。然后，将VPIO基因连接到原核表达载体pET28a上，构建了重组表达质粒pET28a-VP1O，转化大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达。SDS-PAGE电泳表明。VP1O基因在大肠杆菌中获得表达。Western blotting检测证实表达的VP1O蛋白具有良好的生物学活性。对表达蛋白通过包涵体洗涤的方法进行初步纯化，获得了较高纯度的VP1O蛋白。     

猪圆环病毒病和猪繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗免疫效力

利用猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗免疫4周龄仔猪,免疫后7、14、21、28d采血,测定免疫后血清中抗PRRSV、PCV中和抗体和ELISA抗体较价,并于免疫后28d分别用PRRSV和PCV2攻毒,攻毒后每日检测猪体温和观察临床症状,于攻毒后21d所有存活猪全部扑杀,分别对每头猪肺、肝、脾、淋巴结、心和血进行剖解病理和组织病理学观察及PRRSV和PCV2核酸检测,以确定该疫苗免疫保护率。结果表明,所有试验猪于免疫后7d血清抗体开始检出,28d达到峰值,免疫后28dPRRSV和PCV2攻毒保护率均为100%(5/5)。     

应用套式PCR分段扩增犬瘟热病毒融合蛋白的全基因

为研究犬瘟热病毒（ＣＤＶ）融合蛋白各段功能,根据ＣＤＶＯｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株的融合蛋白基因序列,设计合成了１０条寡聚核苷酸引物。对此１０条引物进行不同的配对,将１株犬瘟热疫苗弱毒株细胞培养物的总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增,利用１次ＰＣＲ扩增得到了７个基因片段,最长的达１６６９ｂｐ,最短的为３１４ｂｐ;应用套式或半套式ＰＣＲ,扩增得到了能覆盖整个融合蛋白基因的８个片段     

马动脉炎病毒N蛋白基因GST融合表达载体的构建及表达

采用RT-PCR方法扩增出马动脉炎病毒核衣壳蛋白基因0RF7,并将其克隆到pMDl8-T载体,构建成重组质粒pMDl8-N,在上海生物工程公司测序。结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与EAVNC-002532株的同源性为99％。表明0RF7是EAV基因组内的保守序列,将0RF7亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组质粒pGEX-6P-N,用pGEX-6P-N转化表达菌株BL21（DE3）,诱导表达后SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,克隆在谷胱苷肽硫转移酶（GST）下游的核衣壳蛋白基因与GST获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-N分子质量约为40ku,为马动脉炎病毒病血清学诊断方法的建立奠定了基础。     

应用曲细精管注射法建立人白细胞抗原B27 (HLA-B27)转基因鼠

曲细精管注射法的原理是,精子由精原干细胞分化成熟而来,精原干细胞在雄性动物出生后,一直处于不断分裂增殖状态。将外源基因转染到曲细精管内的精原干细胞,使其整合到干细胞的染色体中。这样,由干细胞分化成熟的精子就有可能携带外源基因。由于外源基因整合于精原干...     

禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型夹心ELISA方法的建立

将禽流感病毒(AIV)H5、H7、H9血凝素亚型标准血清中的IgG作为包被抗体,H5、H7、H9血凝素亚型单克隆抗体作为第二抗体,建立了双抗体夹心ELISA(AC-ELISA)方法,并优化了反应条件.结果表明:单抗和标准血清最适工作质量浓度分别为5、10 mg/L,标准阳性血清于4℃包被12 h,二抗作用条件为37℃作用1 h,封闭条件为37℃作用1 h,酶标抗体工作条件为1∶5 000稀释后,37℃作用1 h,底物作用条件为37℃作用10 min.阴阳性抗原临界值为0.274～0.332.本方法具有很高的特异性和敏感性.     

马动脉炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据已报道的马动脉炎病毒基因组保守基因核苷酸序列，设计并合成了1对引物，通过对影响PCR扩增因素的筛选，成功地从病毒感染的细胞中扩增出约200bp的片段，与理论设计值(204bp)大小一致。而正常的RK-13、BHK-21和Vero细胞和同为动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)作为对照的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明，该方法可以检测出10^-4个TCID50的病毒含量，说明具有较好的敏感性。