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以马蓝为研究材料,对马蓝基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化.结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量的马蓝基因组DNA.电泳检测结果表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要.同时对马蓝RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合马蓝RAPD分子标记的最佳反应体系,即20 μl反应体系中含有1.25 U TaqDNA聚合酶,0.25 mmol/LdNTP,2.5mmol/L Mg2+,50 ng模板DNA,1.0 μmol/L引物;反应程序中最佳退火温度为38℃. 相似文献
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马蓝基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化 总被引:1,自引:1,他引:0
摘 要:以马蓝为研究材料,对马蓝基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量的马蓝基因组DNA。电泳检测结果表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要。同时对马蓝RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合马蓝RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含有1.25UTaqDNA聚合酶,0.25mmol/LdNTP,2.5mmol/LMg2+,50ng模板DNA,1.0μmol/L引物;反应程序中最佳退火温度为38℃。 相似文献
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