牛坏死杆菌溶血素基因克隆、表达和抗原性分析

为了研制新型有效安全的牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂,试验利用PCR扩增技术获得了牛坏死杆菌H05菌株hly基因的全长及5个相互重叠的截短片段的核苷酸序列,并利用原核表达载体p ET-32a对hly基因的5个截短片段进行了表达和抗原性分析。结果表明:hly-2、hly-3和hly-4片段获得了成功表达,且hly-2(aa 278~567)、hly-3(aa 566~888)和hly-4(aa 887~1163)重组蛋白能够与牛坏死杆菌多克隆抗体反应。说明hly-2、hly-3和hly-4可以用于研制新型牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂。     

胞壁酰二肽对体外奶牛乳腺上皮细胞生长及胞内NOD2 mRNA表达的影响

【目的】奶牛乳房炎是奶牛养殖业中最为常见,同时也是带来经济损失最为严重的疾病之一,其主要病因是细菌感染。奶牛乳腺的固有免疫是抵抗病原菌入侵的第一道防线。NOD2是机体固有免疫模式识别受体核苷酸结合寡聚域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)蛋白家族中的重要一员,通过识别其特异性配体胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)——一种广泛存在于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁中的成分,而参与抵抗多种病原菌入侵。奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)除泌乳以外,还是奶牛乳腺的免疫屏障。本试验欲探究MDP对BMEC体外生长状态及胞内NOD2表达量的影响。【方法】选取健康泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺腺泡为组织原材料,采用胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离BMEC;使用上皮细胞特异性表达的角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)及成纤维细胞特异性表达的波形蛋白(Vimentin)抗体,通过免疫荧光技术对纯化后获得的细胞进行鉴定;将BMEC设为6个处理组,分别添加浓度为0(空白对照组)、1、5、10、15及20μg·mL~(-1)的MDP,24 h后显微镜下观察细胞状态,同时提取细胞RNA并反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR方法检测BMEC中NOD2的表达量。【结果】(1)胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离得到的细胞CK-18免疫荧光结果为阳性,而Vimentin反应为阴性;细胞生长状态良好。(2)空白对照组、1、5及10μg·mL~(-1) MDP刺激组的BMEC生长状态良好,无任何肉眼可见变化;15μg·mL~(-1) MDP刺激组可见少量的BMEC脱落;而20μg·mL~(-1)MDP刺激组可见大量BMEC脱落,漂浮,且即使仍贴壁的细胞,其形态也发生了变化。(3)与空白对照组相比,各刺激组细胞NOD2 mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,即刺激时间为24 h时,随着MDP浓度的增加,BMEC中NOD2受体mRNA的表达量逐渐增加(P0.05)。【结论】成功获得了纯度较好的BMEC,该细胞生长状态良好,可以用于后续试验;虽然BMEC中NOD2受体mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,但在保持BMEC生长状态正常的前提下,MDP体外刺激浓度应控制在10μg·mL~(-1)以下。这些结果提示我们:当病原菌入侵乳腺时,BMEC可以通过NOD2受体途径参与免疫防御反应,但这种防御能力受细菌数量或毒力强度的影响。即在一定的细菌数量或毒力范围内,随着细菌数量的增加或毒力的增强,奶牛乳腺的免疫防御反应也增强,进而清除外来病原菌;而当细菌数量或毒力强度超过一定范围时,乳腺组织受到严重损伤,免疫防御屏障也随之崩溃,奶牛乳腺局部甚至全身将呈现出明显的临床症状。     

基于线上病理学公益网络平台兽医病理学的“PBL+CPC”教学模式初步实践

为适应高等农业类院校对动物医学专业学生培养的新要求,提高课堂教学质量,黑龙江八一农垦大学基于线上病理学公益平台构建兽医病理学特色教学资源库,利用资源库特征性临床病例,将“PBL+CPC”教学模式引入兽医病理生理学和兽医病理解剖学课堂,通过问卷调查和学生考核成绩对“PBL+CPC”教学模式进行综合评价,分析其存在的问题。结果表明,“PBL+CPC”教学模式能提高学生学习兽医病理学的积极性、自主性和主动性,培养学生的临床思维能力和创新能力。对两种教学模式进行有机融合将成为动物医学专业兽医病理学教学改革的新方向,结合PBL+CPC式教学促进兽医病理学教学启发与创新的发展将是解决传统教学弊端的关键所在。     

治疗奶牛乳房炎中药凝胶剂的制备及质量控制

奶牛乳房炎是兽医临床常见疾病,目前常以乳房灌注给药方式治疗此病。中药以毒副作用小、不易产生耐药性等特点在治疗奶牛乳房炎上得到了广泛应用并取得了较好效果。本试验结合临床实践,     

鸡呼吸道病主要病原多重检测技术研究进展

鸡呼吸道病是一系列复杂因素对机体综合作用的结果，引起此类疾病的主要病原体包括新城疫病毒、禽流感病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、禽肺病毒、鸡毒支原体、大肠杆菌及巴氏杆菌等。随着养禽业集约化程度的不断提高，鸡呼吸系统疾病的发病率呈逐年上升趋势，而且大多数病例常是由多种病原混合感染或因免疫抑制而发生继发感染，     

大鼠肝细胞系BRL-3A细胞Hsp70过表达条件的优化

为了使热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)在BRL-3A细胞中过表达,试验以带有标签基因的腺病毒感染BRL-3A细胞,根据感染效率初筛病毒感染的最适浓度和作用时间;然后用初筛出的最适浓度(4×107,2×107,1×107,0.5×107,0.25×107pfu/mL)和时间(24 h和48 h)感染BRL-3A细胞,优化Hsp70重组腺病毒感染BRL-3A细胞的条件,并应用荧光定量RT-PCR和免疫蛋白印记方法检测Hsp70的mRNA和蛋白表达量。结果表明:当用1×107pfu/mL病毒AdCMV-Hsp70按照最佳感染条件的感染复数(MOI)=20感染BRL-3A细胞48 h时,能使Hsp70表达量比病毒空载体感染细胞和无病毒的对照组细胞极显著升高(P0.01)。     

电刺激疑核对TNBS诱导的IBD大鼠TGF－β表达的影响

为探讨疑核对炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）相关细胞因子TGF-β的调控作用以及在IBD的发生发展过程中发挥的作用,以三硝基苯磺酸（TNBS）诱导IBD大鼠动物模型通过Real-Time PCR和ELISA方法,利用疑核定位技术,检测急性电刺激疑核前后,细胞因子TGF-β在TNBS诱导的IBD大鼠结肠、胸腺、脾脏、外周血淋巴细胞中mRNA水平的变化和血清中蛋白浓度的变化。结果表明,急性电刺激IBD大鼠疑核后TGF-βmRNA表达水平在结肠、脾脏和外周血淋巴细胞中均显著高于对照组和假刺激组;而在胸腺中TGF-βmRNA表达降低。急性电刺激IBD大鼠疑核后血清中TGF一8蛋白浓度显著高于对照组和假刺激组。由此认为,疑核可能通过对IBD相关细胞因子TGF一8的调控,介导IBD的发生、发展过程,从而对IBD的发生、发展发挥调节作用。     

铜对奶牛免疫能力的影响

[目的]检测实验奶牛血清中的微量元素铜的水平及相关指标的变化规律。[方法]实验所用实验动物均选自黑龙江地区某奶牛场,常规水平饲养管理,TMR全混合日粮自由采食。根据DHI数据随机选择体重、胎次(2~3次)、泌乳期(0~10d)、体况和饲养管理高度相似的泌乳奶牛50头。[结果]实验奶牛血清铜水平与IL-2的相关性为R=0.355,显著性为P=0.011。实验奶牛血清铜水平与IL-2呈显著正相关,泌乳奶牛血清中的IL-2会随着铜水平的升高而有所升高。实验奶牛血清铜水平与IL-1的相关性为R=0.215,显著性为Ρ=0.133,P>0.05。实验奶牛血清铜水平与IL-1不相关。实验奶牛血清铜水平与TNF-α的相关性为R=0.185,显著性为P=0.198,P>0.05。[结论]实验奶牛血清铜水平与TNF-α不相关。     

“玉鹅种养”对土壤pH值及氮、磷、钾、有机质含量的影响

为了探究"玉鹅种养"对玉米地土壤的改良情况,试验于2012—2017年连续6年选择适宜时间在玉米地里放养鹅,不施化肥和农药,作为试验组(玉鹅种养),同时以没有放养鹅而施用化肥和农药的玉米地为对照组,待玉米老熟后随机采集放养鹅玉米地和对照玉米地的土壤测定pH值及氮、磷、钾、有机质含量,并进行对比分析。结果表明:试验组玉米地土壤的pH值低于对照组,更接近于中性土壤;试验组玉米地土壤中有机质含量逐年升高,且都高于对照组,尤其是碱解氮和速效钾的含量显著提高。说明"玉鹅种养"模式有利于改善玉米地土壤肥力、降低土壤pH值,种养结合有利于黑土地肥力恢复。     

新型兽用抗菌药沃尼妙林

沃尼妙林是20世纪90年代中期国外批准新上市的一种动物专用抗生素,用于治疗猪、牛、羊、家禽等霉形体病及细菌性疾病。作为一种新型抗菌药物,沃尼妙林具有抗菌活性强、低残留、休药期短等特点。