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1.
从BL21(DE3)E.coli菌株中以PCR的方法扩增得到了与T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase,T7pol)基因大小一致的DNA片断。将PCR产物纯化后直接克隆到pGEM—T载体中,经酶切鉴定和DNA序列分析表明克隆得到了正确的T7pol基因。将T7pol基因亚克隆入pET-28b( )中,构建得到原核表达质粒pET28T7。该质粒的BL21(DE3)pLysS转化菌在IPTG的诱导下可表达约98800的蛋白,这与T7pol的相对分子质量一致。将该质粒转化DH5α、JMl09、HBl01、BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS等5种不同的宿主菌,仅有转化T7pol酶活性受到抑制的宿主菌BL21(DE3)pLysS才能得到转化子,而其余4种T7T7pol酶活性不受抑制的E.coli宿主菌不能得到转化子。pET28T7原核表达质粒这种仅能在T7pol酶活性受到抑制的宿主菌中才能存活的现象说明本试验所克隆的T7pol基因能正确表达出具有RNA转录酶活性的蛋白。 相似文献
2.
重组逆转录病毒载体的包装 总被引:1,自引:1,他引:0
将3.7kb的LacZ基因片段克隆到含标志基因Neo的逆转录病毒载体,pLXSN与pLNCX的多克隆位点,构建了含有LacZ基因的重组逆转录病毒载体pLLSN和pLNCL.在测定了G418对饥装细胞系PA317的最小致剂量后(最小致死剂量为0.3g/L),通过脂质体Lipofectin与磷酸钙2种介质,分别将2种重组逆转录病毒载体导入包装细胞系PA317进行包装,并以0.3g/L,的G418进行筛选,得到多个G418抗性克隆,经扩大培养,传代,分别得到包装pLLSN与pLNCL的2株阳性细胞,电镜下可见阳性细胞的培养上清中具有逆转录病毒形态特征的成熟病毒粒子,本0研究为运用逆转录病毒载体系统,解决转角因效率低的问题奠定了基础。 相似文献
3.
含LacZ重组逆转录病毒的制备及其在NIH3T3细胞的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
构建了含有3.7kbLacZ的重组逆转录病毒载体,转染包装细胞系PA317后,经G418筛选,得到了G418的抗性的产毒细胞系,用收获的含有重组逆转录病毒粒子的浓缩病毒上清,感染NIH3T3细胞。经X-gal染色检测,发现表达了LacZ的NIH3T3细胞呈蓝色。 相似文献
4.
为研究A型流感病毒的重要毒力因子PB1-F2对蛋白激酶R(PKR)的调控机制,通过纯化GST-PB1-F2融合蛋白,利用GST pull-down试验证实了PB1-F2与PKR发生相互作用;采用免疫荧光试验进一步验证了二者的相互关系;实时荧光定量PCR表明PB1-F2能负调控PKR及IL-6的mRNA水平;采用siRNA干扰PKR基因的表达后,PB1-F2抑制IL-6的mRNA转录作用更显著。进一步运用蛋白免疫印迹方法检测了PB1-F2对PKR及其底物eIF-2α蛋白磷酸化水平的影响,显示过表达PB1-F2后,PKR及eIF-2α的磷酸化表达水平明显下调。本研究表明PB1-F2与PKR相互作用而抑制PKR磷酸化活化,并通过PKR调控IL-6的表达,为探索PB1-F2的未知生物学功能提供了重要信息。 相似文献
5.
引种健宝草、苏丹草和连玉十五青贮玉米,调查当年生长情况和产草量。结果表明健宝草营养生长周期长,刈割二次,产草量高;连玉青贮玉米中熟,抗旱、涝、病的性能强,是青贮收种的好原料。 相似文献
6.
为明确施氮量和密度互作对盐碱滩涂水稻产量和品质形成特征的影响,以淮稻5号为试验材料, 设置6个施氮量处理:N0(0 kg·hm-2)、N210(210 kg·hm-2)、N255(255 kg·hm-2)、N300(300 kg·hm-2)、N345(345 kg·hm-2)、N390(390 kg·hm-2),2个移栽密度处理:D1(33.4 万穴·hm-2,12 cm×25 cm)、D2(27.8 万穴·hm-2,12 cm×30 cm),测定了水稻产量及品质形成的相关因素。结果表明,随施氮量增加,单位面积穗数和每穗粒数呈先上升后下降的趋势,以N300处理最高;结实率和千粒重呈下降趋势。不同密度间比较,高密度处理的穗数和千粒重高于低密度处理,每穗粒数和结实率呈相反趋势。施氮量与移栽密度组合中,以N300D1处理的产量最高,达7 978.83 kg·hm-2。施氮量的增加提高了稻米的加工品质与营养品质,同时降低了外观品质与蒸煮食味品质。移栽密度的增加提高了稻米的营养品质,但降低了加工品质、外观品质和蒸煮食味品质。综合分析认为,施氮量300 kg·hm-2和移栽密度33.4万穴·hm-2, 是盐碱滩涂水稻获得高产优质的栽培措施。本研究结果为盐碱滩涂水稻的高产优质栽培提供了理论依据。 相似文献
7.
为检测细胞骨架抑制剂对狂犬病病毒(RABV)感染细胞的抑制作用,筛选了秋水仙素(Col)和细胞松弛素D(CytoD)2种骨架特异性抑制剂在人神经瘤细胞SH-SY5Y上的适宜浓度,探讨其对RABV感染及复制的影响。结果表明:随着细胞骨架抑制剂浓度的升高,微管和微丝的破坏加剧;当Col浓度分别为0.065 mmol/L和0.130 mmol/L及CytoD浓度分别为0.25μg/mL和0.50μg/mL时,微管、微丝结构及细胞活力均与对照组无显著差异(P0.05),2种骨架抑制剂对RABV的感染及复制均有抑制作用。通过对RABV培养物的OD值和G基因mRNA的定量检测,发现CytoD对RABV感染的抑制作用较Col更明显,Col对RABV复制的抑制作用较CytoD更明显。 相似文献
8.
9.
盐碱地耕作和洗盐方式对水稻生长及产量的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
在盐碱地种植水稻的关键是降低土壤盐碱含量。采用大田试验,研究了大田耕作方式及洗盐方式对水稻生长及产量的影响。结果表明,冬耕能显著降低大田耕作层的土壤电导率,冬耕结合洗盐的方式效果更好。与不冬耕处理相比,冬耕处理水稻叶片黄叶率显著降低,叶面积指数、干物质及氮积累量显著增加。不同耕作方式下,洗盐均能降低土壤电导率,改善水稻生长状况,提高产量。在冬耕条件下,洗盐2次和洗盐1次的处理间差异不显著。不冬耕条件下,洗盐2次和洗盐1次的处理,除了黄熟期生物量和产量差异不显著外,其他水稻生长参数差异均达显著水平。与不冬耕处理相比,冬耕显著提高了水稻的产量,增产达66.7%。 相似文献
10.