猪轮状病毒VP4、VP6蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)属于呼肠孤病毒科,轮状病毒属,是引起幼年仔猪发生腹泻的主要病原之一,常与其他病原发生混合感染。PoRV结构蛋白VP4、VP6分别组成病毒的纤突及内衣壳,在病毒侵入、复制以及维持病毒粒子形态中起到重要作用。为研究PoRV VP4和VP6蛋白相关特性,分别扩增VP4开放阅读框中抗原性较好的两部分：58～1 080 bp基因片段(1 023 bp)、1 657～2 328 bp基因片段(672 bp),以及VP6完整开放阅读框(1 191 bp),成功构建重组表达质粒pET32a-VP4-672、pET32a-VP4-1023和pET32a-VP6,经测序正确后转化BL21感受态细胞中,经IPTG诱导,重组蛋白均以包涵体形式表达,融合蛋白大小分别约为44,58,64 kDa,与预期大小相符。将纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔源多克隆抗体,间接ELISA方法测定多抗效价均在1∶10⁶以上,免疫印迹(Western blot)和间接免疫荧光(IFA)检测结果显示多抗均可与病毒蛋白产生良好的抗原抗体反应。本研究结...     

内蒙古典型草原不同放牧强度下羊草光合生理生态特性分析

通过对内蒙古典型草原不同放牧强度下羊草光合日动态、叶绿素荧光参数以及光合生理生态指标的测定,分析探讨了放牧对羊草光合及生理生态特性的影响。结果表明:羊草净光合速率、蒸腾速率、气孔导度随放牧强度的增大而增大,T2放牧强度下羊草光合日动态为双峰曲线,出现"午休现象",非气孔因素是主要原因;叶绿素荧光参数Fv/Fm三种处理间差异不显著,ΦPSII、qP、ETR三种参数随放牧强度的增大而增大,T2放牧强度下的值显著大于T0和T1;T1放牧强度下羊草相对叶绿素含量显著小于T0和T2,叶干物质含量则相反,比叶面积和干物质含量二者呈负相关关系;羊草叶片数、叶片长度随放牧强度的增大而下降。由此表明,适度放牧有助于羊草光合作用,叶片形态出现缩小特征,以适应放牧干扰。     

SMAD1基因的沉默和过表达及对秦川牛原代成肌细胞生肌的影响

【目的】为了探索秦川牛（Bos taurus）SMAD1基因在成肌细胞分化过程中的分子作用机制,通过研究沉默、过表达该基因后对牛原代成肌细胞分化及成肌相关基因表达量的影响,以期为BMP信号通路在牛肌肉组织生长发育过程中的作用机制提供理论依据。【方法】根据Genbank牛SMAD1（NM_001077107.2）已知序列设计并合成靶向沉默SMAD1基因的干扰序列siSMAD1和阴性对照siRNA-NC。以秦川牛原代成肌细胞cDNA为模板,利用PCR技术克隆获得SMAD1基因CDS序列,构建腺病毒过表达穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP-bSMAD1。将腺病毒基因组质粒和腺病毒载体穿梭质粒共转染到HEK 293细胞中,通过Cre-loxp重组酶获得重组腺病毒。获得的携带目的基因的腺病毒标记为AD-bSMAD1,重组质粒pDC316-EGFP标记为AD-NC,用做对照组病毒,利用LaSRT法测定腺病毒的滴度。将获得的干扰序列siSMAD1和过表达腺病毒AD-bSMAD1分别侵染秦川牛原代成肌细胞,采用实时荧光定量PCR检测SMAD1基因和成肌标志基因MyoD、Myf5、MyoG的mRNA水平,并观察对细胞分化融合情况的影响。【结果】成功获得了1条能有效沉默SMAD1基因siRNA,将其转染秦川牛原代成肌细胞后进行人工诱导分化,相比对照组,SMAD1基因分别下调了75.4%（诱导1d,P<0.01）、66.7%（诱导3d,P<0.01）、60.0%（诱导6d,P<0.01）、54.7%（诱导9d,P<0.01）。此外,还成功构建了秦川牛SMAD1基因的腺病毒过表达穿梭载体,获得了滴度为1×10 ¹⁰pfu/mL的过表达重组腺病毒AD-bSMAD1。与对照组相比,高滴度过表达病毒AD-bSMAD1侵染秦川牛原代成肌细胞0、1、3、6、9d后,与对照组相比,SMAD1基因的表达水平分别上调了2.10倍（诱导1d）、3.19倍（诱导3d）、105.3倍（诱导3d）,P<0.01）和144倍（诱导9d,P<0.01）;结合肌管形成过程的变化和实时荧光定量结果证明,SMAD1基因促进原代成肌细胞分化和肌管形成,并显著上调成肌标志基因MyoD、Myf5、MyoG的表达。 【结论】获得了能有效沉默秦川牛原代成肌细胞SMAD1表达的特异性的干扰序列siSMAD1,以及可成功实现过表达SMAD1基因的腺病毒介导的体外表达载体,可正向调控成肌细胞的分化和肌管形成过程。     

猪腹泻相关肠道病毒分离研究进展

猪腹泻是全球养猪生产中最常见的疾病之一,病毒性腹泻具有传播快、致死率高和防控难的特点。常见的引起仔猪腹泻的病毒包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV),近几年新发现的猪δ冠状病毒(PDCoV)、猪嵴病毒(PKV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)也与仔猪腹泻相关。病毒分离是病毒感染诊断的金标准,也是进行病毒研究的前提。对上述6种常见猪肠道病毒的分离进展进行综述,可为掌握这些病毒的分离情况、疾病发展动向监测、疫苗研发以及猪腹泻病的防控提供参考。     

土壤剖面水分传感器的边缘电磁场分析

为了提高基于驻波比原理（Standing Wave Ratio,SWR）的土壤剖面水分传感器非接触式测量精度及传感器在田间土壤水分测量中的实用性,该研究基于电磁仿真软件和印刷电路板工艺设计了一种基于边缘电磁场理论的小型定向测量探头,并进行了探头阻抗变换电路的设计,最后借助矢量网络分析仪探究了探头测量与介质、电导率的关系。在论证检测原理有效性的基础上,首先采用High Frequency Structure Simulator电磁场仿真验证探头结构的合理性。并配置不同介电常数的介质溶液进行试验,进行了试验检验,确定了此剖面土壤水分传感器的阻抗特性及测量范围。同时,为了分析土壤电导率对测量结果的影响,配置不同水分、电导率梯度的土壤样本,利用矢量网络分析仪分析了探头阻抗与水分及电导率的关系,得出结论：在土壤含水率3%～56%、土壤电导率0～6 300 μS/cm时,水分测量受电导率影响的最大绝对误差6.33%。与ET-5、5TE两种商用传感器受土壤电导率影响精度性能进行对比,传感器在非盐碱土壤（电导率在0～6 300 μS/cm内）受土壤电导率影响的最大土壤体积含水率相对误差相比其他两款传感器减少了0.17%～5.27%,受电导率影响在非盐碱土壤测量时更小,且传感器探头具有体积小、成本低、非接触式定向测量受内部介质干扰较小等优点,基本满足非盐碱地土壤田间实际检测需求。研究成果可为土壤剖面水分测量提供理论基础与技术参考。     

活立木茎干水分状况实时检测传感器研究

活立木茎干水分状况是植物生命状态的有效体现,其中茎干含水率(Stem water content, StWC)和液流密度(Sap flux density, SFD)是研究植物体内水分变化规律的重要参数。准确检测活立木茎干同一空间位置的含水率和液流密度可以更有效地分析2个参数的关系、评估植物生长状况。将基于驻波率(Standing wave ratio, SWR)原理的茎干水分检测方法和基于热比率法(Heat ratio method, HRM)原理的茎干液流检测方法结合,设计了活立木茎干含水率和液流复合参数检测传感器,复合传感器的含水率检测单元和液流检测单元复用一套三针式探针,可对活立木茎干同一位置的含水率和液流实时精准检测。含水率检测单元输出电压与介电常数(6～53.3范围内,对应茎干含水率为0～85%)具有良好的线性关系(决定系数R²=0.970 1),静态稳定性良好(长时间测试最大波动为0.6%全量程)。以杨树为研究对象,含水率检测单元与BD-IV型植物茎体水分传感器的对比实验结果一致(决定系数R²=0.980 0)。液流检测单元与S...     

承德市:实施“六字”攻坚工程 助推林业提质增效

正2018年是深入贯彻落实党的十九大精神的开局之年,是决胜全面建成小康社会、实施"十三五"规划承上启下的关键一年。承德市林业局以习近平新时代中国特色社会主义思想为行动指南,贯彻落实习近平总书记关于"张承地区要定位于京津冀水源涵养功能区,同步考虑解决京津周边贫困问题"的重要指示,大力弘扬"牢记使命、艰苦创业、绿色发展"的塞罕坝精神,以项目为载体,以改革为动力,以市场为导向,以科技为支撑,依法治林,积极发展,科学经营,持续利用,全力构建完善的林业生态体系、发达的林业产业体系和繁荣的生态文化体系,为京津冀协同发展和承德绿色崛起     

承德市林果科技示范点建设见成效

2013年承德市林业局本着“栽植标准化、规模化，管理科学化，品种优质化”的原则，在全市建设集新品种、新技术、新机制于一体的特色林果科技示范点100个，其中直接筹资建设的12个市级示范点已取得了阶段性成效，为林果农建立了可学、可看、可用的技术平台，辐射带动了全市经济产业发展。     

巩固退耕还林成果项目实施中存在的问题和建议

根据河北省退耕还林工程后续产业问题的实地调查,客观的评价了河北省退耕还林工程建设情况,对巩固退耕还林成果方面存在的问题进行了初步分析,并提出了巩固退耕还林成果的对策和建议。     

高效液相色谱在食品药品检测中的应用

现如今,食品、药品安全隐患问题已经成为全社会关注的焦点,利用先进的检测技术对食品、药品中一些物质的含量进行详细的分析和全面的了解,有利于实现食品药品的安全控制.高效液相色谱是一种分离技术,目前,在食品、医药领域中已得到广泛应用.本文综述了高效液相色谱的主要技术分离原理及其在食品、药品安全及中的应用,以期为今后高效液相色...