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为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒(DTMUV)抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku。Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件。重组抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑。该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21%~7.27%和3.4%~7.2%,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性。用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3%。 相似文献
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<正>布鲁氏菌病又称布病或者波浪热,是由布鲁氏杆菌属的细菌引起的以感染牛羊为主的慢性、全身性的人畜共患传染病。1病原导致布鲁氏菌病的病原是布鲁氏杆菌,该菌菌体较小,形状不规则,呈杆状或似球状,革兰氏染色为阴性,属革兰氏阴性杆状菌,其分7个菌,包括羊布鲁氏杆菌、牛布鲁氏杆菌、猪布鲁氏杆菌、绵羊布鲁氏杆菌等,其中牛、羊、猪类菌的危害最严重,羊布鲁氏杆菌的致病能力最强。 相似文献