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柑橘品种鉴定的SSR标记开发和指纹图谱库构建 总被引:3,自引:0,他引:3
【目的】筛选出一套SSR核心引物,用于构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,为柑橘种苗认证、品种登记和植物新品种保护提供技术支撑。【方法】以柑橘属8个主要栽培种类为试材进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,筛选出多态性丰富、扩增条带稳定的引物对部分参试品种进行PCR扩增,扩增产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行进一步的引物筛选;筛选得到的引物进行荧光标记,并选用部分柑橘品种进行PCR扩增,扩增产物利用基因分析仪检测,分别计算各引物的PIC值、等位基因数目,选取一套多态性丰富的适合进行荧光毛细管电泳检测的SSR引物组合,进而对所有参试品种进行分析,构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,同时利用筛选的SSR标记对参试品种进行鉴定。【结果】初期以柑橘属8个种的代表品种(太田椪柑、沙田柚、沅江酸橙、大红甜橙、邓肯葡萄柚、枸橼、费米耐劳柠檬和墨西哥来檬)为材料,用362对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经4%琼脂糖凝胶电泳检测,初步筛选出80对种间多态性高、扩增稳定的SSR引物;进一步从8个种类里选择不同类型的64个柑橘品种,用上述筛选出的80对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,再筛选出60对品种类型间多态性高、扩增稳定、条带清晰的SSR引物,并分别进行荧光标记;另以168份柑橘品种为材料对上述60对SSR引物进行PCR扩增,经荧光毛细管电泳检测,依据各引物的PIC值、等位基因数目、峰图读取难易程度、扩增稳定性及染色体位置等,最终筛选出21对SSR引物作为指纹图谱库构建的核心引物。为消除不同仪器、不同试验批次等引起的误差,为21对SSR引物各主要等位变异选择相应的参照品种。根据各引物标记的荧光颜色及扩增片段大小进行合理组合,21对SSR引物可分成5组进行多重电泳,共采集500份柑橘品种的DNA指纹。利用SSR标记,有111份品种仅用1对引物即可鉴别,86份品种用2对引物组合即可鉴别,24份品种用3对引物组合即可鉴别,另外279份品种虽无法单独一一鉴别,但可分为87个小组,组内品种无法区分,组间品种易鉴别。【结论】利用筛选出的21对SSR核心引物,构建了包含500份柑橘品种的DNA指纹图谱库,筛选出部分品种的特异标记,可以鉴别221份柑橘品种和87个品种组合,构建了基于毛细管电泳平台的柑橘SSR分子标记品种鉴定体系。 相似文献
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巨峰葡萄实生苗阶段发育过程中几种同工酶酶谱的变化 总被引:2,自引:0,他引:2
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,分析了三年生巨峰实生苗阶段发育过程中不同节位木质部的过氧化物酶、多酚氧化酶和超氧物歧化酶同工酶谱带。结果表明:不同节位木质部的过氧化物酶同工酶的一条谱带,从茎基部到首次出现卷须的部位其活性增强,随后便消失。在休眠期,过氧化物酶同工酶不存在阶段发育的酶谱差异性;在生长期则随着葡萄蔓阶段发育程度的提高酶带数增多,活性增强。超氧物歧化酶同工酶,不论是休眠植株还是活跃生长的植株,其酶谱保持不变,但休眠期酶带多、活性高。过氧化物酶同工酶与多酚氧化酶同工酶酶谱类型一致。 相似文献
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【目的】鉴定纽荷尔脐橙疑似耐寒突变体是否发生了遗传性状变化,评价其耐寒能力是否较野生型增强。【方法】以纽荷尔脐橙突变体与野生型为试材,观测比较春梢叶片性状和果实外观性状,分析比较果实内在品质,应用SSR分子标记鉴定遗传变异,石蜡切片观测比较叶片组织结构,分析比较-6℃低温处理叶片的电解质渗出率、脯氨酸含量、超氧化物歧化酶活性等抗寒性相关指标。【结果】纽荷尔脐橙突变体春梢叶片、翼叶、叶柄等性状,果实形状、果皮颜色、果实大小、油胞等性状与野生型没有差异;果实含酸量连续2 a(年)较野生型低24.7%~38.6%;1对SSR引物扩增显示突变体与野生型在250 bp左右存在2条差异带;突变体叶片细胞结构紧密度、栅栏组织与海绵组织厚度的比值均极显著大于野生型;突变体叶片的电解质渗出率未低温处理以及-6℃处理2~10 h均低于野生型,-6℃处理8 h的电解质渗出率相当于野生型叶片-6℃处理6 h的水平;突变体叶片中脯氨酸含量极显著高于野生型,-6℃低温处理使突变体与野生型叶片脯氨酸含量差异增大;突变体超氧化物歧化酶活性未低温处理(0 h)和低温处理2 h至10 h均显著高于野生型。【结论】该突变体... 相似文献
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特早熟优质柑橘新品系大分4号的特征特性 总被引:1,自引:0,他引:1
柑橘新品系大分4号是大分早生的芽变中选育的特早熟温州蜜柑品系。为了了解其特征特性及推广价值,以大分4号、大分早生、日南1号、宫本和市文为试验材料,在湖南省吉首市、常德市(武陵区、石门县)、长沙市、邵阳市和资兴市等地进行栽培试验,观察各品种的物候期、生长情况,并检测大分4号的果品质量。试验结果表明:大分4号树势较强、结果早、丰产稳产、果实扁平、果皮薄而光滑、肉质柔软、化渣、减酸快、风味浓、品质好、供应期长,适宜于高品质完熟栽培,可作为湖南省柑橘品种的结构改造和升级提供良种资源,在温州蜜柑产区推广。 相似文献
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蛋白质组研究是后基因组时代的热点领域,介绍了蛋白质组概念提出的背景,蛋白质组与基因组的联系与区别,蛋白质纽研究的内容,重点综述了植物蛋白质纽研究的技术.双向凝胶电泳仍为蛋白质分离的核心技术,该技术在某些方面作了改进和发展;生物质谱是蛋白质鉴定的关键技术,进一步发展了生物传感芯片质谱及蛋白质芯片技术;对蛋白质纽研究的信息处理依赖于生物信息学的发展,介绍了国内外相关的蛋白质数据库及建立数据库主要应用的图像软件。 相似文献
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柑橘溃疡病致病基因PthA核定位信号肽抗血清制备及其抑菌的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用PCR法扩增位于柑橘溃疡病菌致病基因pthA C-末端的3个核定位信号序列,并将其克隆到原核表达载体PET32a(+)上,经双酶切及核酸序列测定重组质粒(PthA-NLS),其序列与GenBank中pthA的相关序列有99.9%的同一性。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导了重组多肽的表达,并用Ni2+-NTA纯化柱得到了48kD的纯化重组多肽。把重组多肽注入免疫Balb/c小白鼠,制备了相应的抗血清,Western Blotting和ELISA分析结果表明,抗血清可特异地结合重组多肽,亦可识别溃疡病菌PthA天然蛋白,获得的抗血清可以用于柑橘溃疡病的检测。利用抗血清与溃疡病菌混合接种离体冰糖橙叶片,发现抗血清能推迟溃疡病菌的致病过程,且病斑比对照小,但未能达到抗病的程度。pthA基因末端核定位信号序列的克隆、原核表达及抗血清的制备为进一步研究pthA的致病机理和研发溃疡病快速分子检测技术奠定了基础。 相似文献
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以近年来湖南省引进和选育的4个宽皮柑橘品种(春见、早蜜椪柑、金秋砂糖橘、春香)和4个甜橙品种(锦红、橘湘珑、锦秀、橘湘元)果实为材料,分析各品种成熟果实品质、贮藏期间品质变化、贮藏性能差异和贮藏性指标之间的相关性。结果表明,8个品种柑橘成熟果实品质指标和贮藏性均存在较大差异。其中,宽皮柑橘中的春香贮藏性能最好,可以避开大部分柑橘的上市时间;而金秋砂糖橘最不耐贮藏,适合就近销售或短距离运输。相关性分析结果表明:贮藏过程中可滴定酸(TA)含量与失水率和发病率呈显著负相关,可溶性固形物(TSS)含量与VC含量呈显著正相关。本结果可为柑橘良种筛选及种植推广提供理论参考。 相似文献
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