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以山墙藓幼嫩茎尖为外植体,采用L12(3×24)正交设计方法,对山墙藓配子体消毒方法及培养基类型进行了筛选;通过梯度设计研究不同浓度的蔗糖对配子体形态发生的影响,以建立有效的山墙藓(Tortula ruralis)组织培养快繁体系。结果表明:山墙藓配子体的最佳消毒方法为浓度3%的次氯酸钠溶液消毒5min后,浓度0.05%的升汞溶液二次消毒20s,Beneck培养基为最适消毒培养基;蔗糖对于山墙藓原丝体的形成和扩展生长均具促进作用,浓度为30g/L时原丝体形成时间最早,扩展直径最大,但抑制了芽体的分化,浓度为15g/L时对芽体分化具明显促进作用。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果:Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10 240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。 相似文献
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