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以‘新梨7号’梨叶片为材料,探究影响原生质体分离的主要因素,制备高产优质的叶肉原生质体,并进行基因瞬时转化和表达。将继代30 d的组培苗嫩叶在最佳酶解液(1.0%纤维素酶,0.1%果胶酶,0.4%离析酶,0.5 mol·L-1甘露醇,20 mmol·L-1 KCl,20 mmol·L-1 MES,10 mmol·L-1 CaCl2,1.0 g·L-1 BSA)中酶解12 h,可制备出产量为1.09×106 protopl·mL-1、活力为90%的原生质体。将1~2μg·mL-1 pROK2-GFP质粒DNA通过40%PEG-4000介导转化至上述原生质体中并培养12 h,可以观察到GFP绿色荧光信号,转化率可达40%。 相似文献
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