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为建立一种检测猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的PCR-ELSIA方法,根据GenBank上报道的PCV3全基因组序列,针对其高度保守区域设计1对特异性引物,上、下游引物的5′端分别标记生物素和地高辛。经PCR扩增获得大量带有标记的目的基因,依靠生物素-链霉亲和素的非共价结合作用固定目的基因于载体上,再通过羊抗DIG-HRP的显色反应,建立PCR-ELISA检测方法。结果表明,该方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型无交叉反应,特异性良好。PCR-ELISA方法最低检测限为5.58×102 copies/μL,敏感性比常规PCR高100倍(常规PCR的检测限为5.58×104 copies/μL)。PCR-ELISA方法批内和批间重复性检测的变异系数分别为1.90%~5.20%和3.89%~9.03%。对132份临床样品进行PCV3检测,PCR-ELSIA检出率为9.10%(12/132),高于常规PCR的检出率(4.55%,6/132)。综上,该方法具有特异、灵敏、安... 相似文献
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为筛选抗寒石榴品种,以河南省南阳市淅川县生长的石榴品种突尼斯、中农红、红双喜和千层花1年生休眠期枝条为试材,通过模拟低温胁迫环境,分别在4℃、0℃、-3℃、-6℃、-9℃、-12℃和-15℃的低温下处理24 h,测定相对电导率(REC),脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白、丙二醛(MDA)含量,过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性等指标,并利用隶属函数法综合评价4个品种石榴枝条的抗寒性。结果表明,千层花的半致死温度(LT50)最低,达到-6.94℃,红双喜最高,为-2.27℃;随着温度降低,4个品种枝条POD活性、可溶性糖含量和相对电导率整体呈上升趋势,SOD、CAT活性及MDA、可溶性蛋白含量整体呈先升后降趋势,脯氨酸含量整体呈先降后升趋势。利用隶属函数法综合评价的石榴品种抗寒性强弱顺序为千层花>红双喜>突尼斯>中农红。 相似文献
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