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为探索提取高质量RNA的方法,采用改良CTAB法、SDS法、异硫酸氰胍法和Trizol法从美洲南瓜种皮中提取总RNA.结果表明:改良CTAB法提取的RNA中28 S rRNA和18 S rRNA 2条带清晰,且28 S rRNA在亮度约为18 S rRNA的2倍,两条带之间无弥散现象;OD260/OD280值为1.996 5,OD260/OD230为2.235 7,RNA产率为161 μg/g.异硫酸氰胍法提取的总RNA纯度较高,但产量较低;SDS法和Trizol法提取的总RNA产量较低,且纯度不高.改良的CTAB法从种皮中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,是从富含次生代谢物质的种皮中提取高质量总RNA的有效方法. 相似文献
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近年来,在甘肃省武威地区裸仁美洲南瓜发生了一种叶枯病,采用常规组织分离法对罹病组织进行了病原菌分离培养,以及病原菌的形态、分离培养性状观察和致病性测定.结果表明,引起裸仁美洲南瓜叶枯病的致病菌为瓜链格孢Alternaria cucumerina(E11.et Ev.)E11iott.寄主范围测定表明,该病原菌可侵染所有供试葫芦科植物,其中南瓜、西葫芦和甜瓜发病最严重;丝瓜和苦瓜发病较轻;该病原菌还可引起白菜和菜豆发病.温度和保湿时间对病原菌的侵染影响较大,25~30℃温度范围内最易侵染,病害潜育期仅为2~3天;当保湿时间60h时,病叶率达到88%,而保湿时间为6h时,病叶率仅为8%.南瓜不同品种对叶枯病的抗性差异较大,其中二星、天然、光板1号、无壳(李建民)和金无壳为高抗品种;四星、粒赛金、金大地、郑峰光板、日本南瓜为高感品种. 相似文献
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美洲南瓜(Cucurbita pepo)种皮发育形态观察及其相关酶活性测定 总被引:3,自引:0,他引:3
采用组织整体染色和石蜡切片相结合的方法对美洲南瓜有壳品种04LAg-26-2和无壳品种04LAg-26-28种皮发育形态结构比较观察。结果表明,有壳美洲南瓜种皮是由表皮层、下皮层、厚壁组织层、软组织层和绿色组织层构成,无壳裸仁南瓜的形成主要是授粉后18 d种皮发育过程中厚壁组织中的细胞变形、瓦解,缺少木质素的积累而导致了下皮层、厚壁组织层的缺失;对2个品种的种皮、叶片、叶柄和瓜囊不同组织中木质素合成相关酶活性测定结果表明,无壳品种04LAg-26-28在授粉18 d后,种皮中苯丙氨酸解氨酶(PAL)、肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)、4-香豆酸-辅酶A连接酶(4CL)、肉桂醇脱氢酶(CAD)和过氧化物酶(POD)活性明显降低,而叶片、叶柄和瓜囊中这几种酶活性在授粉18 d 后,呈逐渐增加的趋势。 相似文献
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南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
本文对南瓜叶枯病病原菌瓜链格孢(Alternaria cucumerina)进行了生物学特性研究,结果表明:温度、pH、光照对其生长和产孢都有一定的影响。该病原菌菌丝生长、产孢和萌发的适宜温度为28 ℃,pH为7时菌丝生长最快,pH为8时最易产孢。25 ℃下连续黑暗培养产孢最多。碳、氮源对菌丝生长和产孢量有一定的影响,碳源中甘露醇组菌丝生长最快,山梨醇处理产孢量最多。氮源中牛肉浸膏最适宜菌丝生长和产孢,硫酸铵最差。该菌致死温度为50 ℃。 相似文献
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美洲南瓜(Cucurbita pepo)种皮苯丙氨酸解氨酶基因克隆与表达分析 总被引:2,自引:1,他引:2
【目的】克隆有壳美洲南瓜种皮PAL基因(CP-PAL),研究PAL基因在有壳和裸仁美洲南瓜种皮发育过程中的表达特性,为揭示美洲南瓜种皮发育机理及木质素积累在南瓜种皮发育中的作用等方面提供理论依据。【方法】利用RT-PCR,结合RACE技术克隆CP-PAL的全长序列并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术,采用2-△△Ct方法对种皮发育过程中PAL基因的表达进行分析。【结果】CP-PAL序列全长为1 720 bp,含有一个1 359 bp的ORF,114 bp 5′端非翻译区、236 bp 3′端非翻译区及11 bp polyA结构,可编码452个氨基酸,分子量为48.86 kD,等电点为6.55,原子总数为6 885个,分子式为C2158H3449N607O657S14。通过BLASTX比对表明CP-PAL核苷酸序列及其氨基酸序列与黄瓜PAL核苷酸及其氨基酸序列的相似性最高。CP-PAL包含PAL-HAL、PLN02457及phe_am_lyase 3个结构域及酶活性中心序列(GTITASGDLVPLSYIA),属于Lyase_I_Like超家族。CP-PAL不具有导肽及信号肽,为非跨膜蛋白,可能定位于细胞质及内质网上,属可溶性蛋白。CP-PAL蛋白含有4个酪蛋白激酶Ⅱ识别位点、6个蛋白激酶C识别位点、12个豆蔻酰化位点及2个糖基化位点。此外,分析可知CP-PAL有18个丝氨酸磷酸化位点、6个苏氨酸磷酸化位点及5个酪氨酸磷酸化位点。无规则卷曲是CP-PAL蛋白二级结构中最大量的结构元件,α-螺旋和延伸链分散于整个蛋白质中,且N-末端以无规则卷曲形式存在,C-末端以延伸链形式存在。CP-PAL氨基酸序列同挑选的其他14种植物的PAL氨基酸序列进行多重序列比较,发现功能区域的氨基酸序列较为保守,N-端的差异最大。系统进化树分析表明CP-PAL和黄瓜PAL蛋白的亲缘关系最近。CP-PAL蛋白三级结构以α-螺旋为主要结构元件,β-转角和无规则卷曲较少。实时荧光定量PCR分析表明PAL基因在有壳和裸仁美洲南瓜种皮发育中呈现反向对应的变化趋势:有壳美洲南瓜种皮PAL基因在自交授粉20 d后表达量增加,而裸仁美洲南瓜种皮PAL基因在20 d后表达量下降。整个种皮发育过程中,PAL基因在裸仁美洲南瓜中的表达量低于其在有壳美洲南瓜中的表达量。【结论】从有壳美洲南瓜种皮中克隆得到与木质素合成相关的PAL基因,该基因可能通过参与调控种皮木质素的合成从而影响美洲南瓜裸粒品种的种皮发育。 相似文献