水牛牛巴贝斯虫体外培养的研究：Ⅱ.冷冻血清的应用和筛选

应用冷冻血清对１株采自自然感染的水牛牛巴贝斯虫进行了长达７２ｄ的体外连续培养，共继代２０次，培养７２ｈ红细胞染虫率最高达１４．１％，平均为８％～１０％。培养２０ｄ和３０ｄ的牛巴贝斯虫经液氮保存复苏后，接种于去脾水牛犊均引发了严重的牛巴贝斯虫病，从而说明已建立了水牛牛巴贝斯虫的体外连续培养，且经培养后的牛巴贝斯虫致病力没有改变。本试验利用６头份的冷冻健康水牛血清同时进行培养，结果发现，并非所有的健康水牛血清均适合于体外培养牛巴贝斯虫。这一发现对建立水牛牛巴贝斯虫的体外培养和研究水牛牛巴贝斯虫病均具有重要意义     

抗附红细胞体有效药物的筛选

以PCR检测附红细胞体呈现阳性，且镜检染虫率达909／5以上的猪血样为研究对象，选择几种附红细胞体敏感的药物(血虫净，附红净，庆大霉素，博士914，土霉素，三毒清，红弓链914，附红120，红弓链克，乌金土霉素)和对支原体敏感的恩诺沙星，对立克次氏体敏感的红霉素，采用两种方法进行体外药效试验。附红净对附红细胞体的作用效果最明显，而庆大霉素对附红细胞体基本无效，其他药物对附红细胞体也有一定杀灭效果。     

弓形虫SAGⅠ基因的克隆与原核表达

利用PCR技术从弓形虫RH株基因组中扩增出SAGⅠ部分基因片段,亚克隆入表达载体pGEX-KG,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳显示表达的重组蛋白的分子量为56ku。免疫印记分析显示此表达产物能被猪抗弓形虫阳性血清所识别,表明该重组蛋白具有免疫反应活性。为进一步进行弓形虫病的免疫预防和诊断研究奠定了基础。     

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较.结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4 d)早于ELISA(第14 d)和IHA(第20 d);检出持续时间方面,LAT(54 d)长于ELISA(44 d)和IHA(19 d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8).试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测.     

湖北省水牛巴贝斯虫病的综合防治研究Ⅰ.血清流行病学调查

利用胶乳凝集试验对湖北省不同地区的水牛血清进行了东方巴贝斯虫的血清流行病学调查。结果表明,在流行区血清学检查阳性率为71.74%,在非流行区仅为1.19%。统计学检查结果表明,流行区内不同地区间东方巴贝斯虫感染率无差异,随着年龄的增加,阳性率逐渐升高。利用一数学公式对这次调查结果进行分析后认为,该流行区为稳定的流行区。对流行区应采取的防治措施进行了讨论。     

环介导等温扩增技术检测柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶N377D突变

面对日益严重的磺胺类药物的耐药性,传统的耐药性检测方法已不能满足临床需求,因此开发一种磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法十分必要。本试验建立一种使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)来准确区分柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶(dihydropteroate synthase, DHPS)基因中的点突变(A1129G)的方法。对LAMP反应进行优化,发现在68℃,60 min时,反应的灵敏度和特异性均达到最佳。此时,该方法的最低检测限40 fg,并对5种病原体显示出特异性。在检测的所有46个现场样品中,有43个为阳性结果。     

机手春耕忙 监理来护航——天津市各区县多项举措保障2011年度农机检审工作

天津市各区县农机监理机构加强春耕期间的农机安全生产监督管理工作,使农民在春耕生产过程中,时刻紧绷"安全"这根弦,避免安全事故的发生。1.提前动手,精心准备,稳步推进总检审验工作。北辰农机中心2月22日召开了由全区9个镇的农办主任、农机专职人员参加的农机检审动员会,并与各镇签订了农机安全生产责任书。为方便农民机手,     

机插稻培育壮秧与麦秆全量还田肥料运筹技术探讨

通过机插水稻培育壮秧播种量和激素应用试验,麦秆全量还田机插水稻氮肥施用量和氮肥运筹比例、钾肥施用量等的试验研究,以提高机插稻精确定量栽培技术水平。     

弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达

根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列（AJ132530）的同源性达99.6 %,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础.     

湖北省部分猪场弓形虫感染的血清学调查

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对湖北省部分猪场的弓形虫病进行血清学调查,共检测猪血清293头份.结果表明,阳性血清103头份,平均阳性率为35.2%,其中,母猪的感染率最高(53.8%),育肥猪次之(42.6%),仔猪最低(12.8%).