鸽I型副粘病毒的分离和鉴定

用分离的对鸽有致病性的４株禽副粘病毒通过电镜观察、病毒中和试验和动物回归试验结果显示,病毒粒子呈球形,直径１００￣４５０ｎｍ,表面有纤突;能凝集鸡红细胞,血凝反应能被新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸽Ｉ型副粘病毒（ＰＰＭＶ－１）阳性血情所抑制;接种１月龄乳鸽能使其发病,出现明显症状和病变并有死亡,接种１月龄ＳＰＦ鸡不发病;能在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦｓ）上生长,并能产生细胞病变（ＣＰＥ）;对高温敏感,在５５℃     

两广地区2011--2012年H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进化分析

为探究两广地区H9N2亚型禽流感病毒（avianinfluenzavirus,AIV）的变异情况及分子流行规律,于2011-2012年从该地区发病鸡群中共分离到16株H9N2亚型A1V,并对分离株HA基因进行测序与进化分析。结果表明,分离株HA基因开放阅读框全长均为1683bp,编码560个氨基酸;HA基因核苷酸同源性为88．7％～99．6％,编码氨基酸同源性为91．8％～99．5％。本试验分离毒株与国内疫苗株（GD-SS、SH—F和SD-6）的核苷酸同源性在90．1％～92．6％之间,推导的氨基酸序列同源性在91．6％～94．8％之间。进化分析显示分离株可分为Group1和Group2两个亚分支,与疫苗株均属于欧亚谱系的Y280分支,但亲缘关系较远。分离株HA蛋白裂解位点附近序列有3种形式：PARSSR＋GLF、PSRSSR＋GLF和PARLSR0GLF,均无连续碱性氨基酸的插A,符合低致病性AIv的特征。本试验发现分离株GD4、GX2在HA1的127、295位分别增加一个潜在的糖基化位点;除分离株GD5和GD6外,其余分离株在HAl的216位发生Q216L氨基酸突变,表明其存在感染人的可能性。     

公猪精液PRRSV变异株检测及NSP2、ORF5基因序列分析

用荧光RT-PCR方法从某猪场精液中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株(NSP2 1 594～1 680 bp缺失)核酸阳性.提取1份阳性样品病毒核酸测定和分析其NSP2和OBF5全基因序列,结果表明NSP2基因由950个氨基酸组成,与CH-1a、VR-2332等经典PRRSV相比481位缺失1个氨基酸、532～560位连续缺失29个氨基酸,与JXA1、HUN4等毒株具有相同的缺失特性;ORF5基因第13、151位为具有强毒特性的精氨酸(R),存在4个潜在的糖基化位点,分别位于30～32、35～37、44～46和51～53位氨基酸.遗传进化分析表明,测定序列与JX-A1、HUN4等毒株关系最近,与CH-1a、NVSL等同属一个大分支,而与BJ-4、P129、RespPRRS MLV、VR-2332等处于不同分支.研究证实公猪精液可携带PRRSV变异株,因此猪场(群)在人工授精和引进精液时必须强化检疫和生物安全措施.     

水泡性口炎病毒2种血清型核衣壳蛋白的原核表达及生物信息学分析

用RT-PCR方法从水泡性口炎病毒(vsv)扩增印第安纳(Indiana)和新泽西(New Jersey)血清型核蛋白N基因,分别克隆至pMD20-T载体进行序列鉴定及生物信息学分析.构建重组表达质粒VSV-IN-pBCX和VSV-NJ-pB-CX,并经SDS-PAGE和Western-blot鉴定表明2种血清型病毒核衣壳蛋白N基因在BL21(DE3)宿主菌中成功表达,重组蛋白相对分子质量约为82 000,并能够与各自对应血清型阳性血清反应.这表明2个重组蛋白具有良好的抗原性,可作为用于建立水泡性口炎血清学诊断方法的诊断抗原.     

基于改进ConvNeXt模型的黄羽鸡表皮层黑色素智能分级方法

为解决活体黄羽鸡表皮层黑色素分级方法成本高、效率低下、分级环境易受环境光干扰等问题,该研究探索一种基于ConvNeXt模型的黄羽鸡表皮层黑色素智能分级方法 ConvNeXt-WPCA,用于实现活体黄羽鸡表皮层黑色素智能分级。ConvNeXt-WPCA模型通过以下3点改进提高模型对黄羽鸡黑色素的识别效果：1）针对黄羽鸡黑色素图像RGB三通道内黑色素信息分布不均衡问题,改变输入图片通道权重来增强模型对黑色素特征的提取能力;2）使用部分卷积代替深度可分离卷积,减少模型计算量和内存访问次数提高对计算资源的利用率;3）引入坐标注意力机制,引导模型关注黄羽鸡胸腹部及肛门附近皮肤提升模型精度。同时,该研究还设计一种双光源图像获取装置,分别在自然光和偏振光条件下拍摄黄羽鸡样本,以减小分级结果受环境光干扰的影响,并探索偏振光在黑色素分级任务中的应用潜力。结果表明ConvNeXt-WPCA模型相较标准ConvNeXt模型,针对自然光下黄羽鸡黑色素图像数据集分级准确率提升9.68个百分点,最终达到89.03%的识别准确率,针对偏振光下黄羽鸡黑色素图像数据集分级准确率提升15.26个百分点,最终达到98.87...     

主动免疫血管活性肠肽（VIP）对家鸽繁殖性能影响的初探

将３０对青年鸽随机分为三组,第一组用血管活性肠肽（ＶＩＰ）类似物与牛血清蛋白（ＢＳＡ）的偶联物进行主动免疫ＶＩＰ,第二组注射与第一组等量的生理盐水,第三组不做任何处理。在试验的第一阶段,除第三组外,第一、二组鸽在产蛋后立即将书目是拿出,试验结果显示：第一组与第二组鸽月产蛋量和周抱窝数差异不显著。但第一、二组鸽产蛋量与第三组（自然饲养组）差异极显著。在试验的第二阶段（Ｂ处理过程）均不把蛋拿出,则三组     

PCV2·ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化

[目的]为了研究PCV2-ORF2基因片段在大肠杆菌中的表达与纯化。[方法]用PCR方法扩增PCV2 ORF2基因3′端片段,PCR产物经酶切后与经同样处理过的pET32a质粒连接,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切鉴定并测序后,转化BL21感受态细胞;重组菌液用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。[结果]ORF2基因在大肠杆菌中正确表达,表达的融合蛋白的分子量约为33 ku;在37℃、1 mmol/L浓度下,诱导时间为6 h时表达量最大,占细菌总蛋白的23.62%。表达产物主要以包涵体的形式存在,将包涵体溶解后过Ni-NTA柱纯化可得到较为纯净的目的蛋白。[结论]该研究为猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)和猪皮炎和肾病综合征(PDNS)等疾病的防治奠定了基础。     

PCV2衣壳蛋白羧基端基因在T4噬菌体表面的展示

用PCR扩增猪圆环病毒II型广东分离株的衣壳蛋白羧基端基因,将PCR产物连接到重组型质粒pR上,转化DH5α细胞并筛选阳性克隆;重组质粒经PCR鉴定并测序后,转化E2菌,将重组E2菌与缺陷型噬菌体T4-Z1同源重组后,得到重组噬菌体,SDS-PAGE和Westernbloting分析,表明衣壳蛋白基因在噬菌体表面正确展示,表达的融合蛋白的分子量约为25Ku。     

霍乱弧菌封闭带毒素功能片段△G的原核表达及其免疫增强活性

用PCR扩增了MBP—ZOT质粒上的ZOT基因，该基因编码264～399位氨基酸残基C末端的15ku △G片段，并与经改造后的质粒P^BCX、连接。将重组后的质粒PMLAG在大肠杆菌BL21中表达，将表达的目的蛋白纯化，再将p^BCX-△G片段与传染性腔上囊炎病毒VP2包涵体蛋白通过滴鼻免疫途径对14日龄SPF鸡进行联合免疫试验，分别于免疫后第10、20d采集血清样品，进行ELISA试验，检测免疫后IBD抗体效价。动物免疫试验发现：融合蛋白P^BCX △G起到了明显免疫增强效果，与VP2重组蛋白联合免疫2次后，血清IBD的VP2 IgG抗体效价是单独用VP2免疫组的3倍，明显高于空白免疫组。     

不同人工鸽乳０—１０日龄乳鸽的饲喂效果

用１、２、３、４、５五种不同营养配方的人工鸽乳饲喂刚出壳且未经亲鸽喂过的雏鸽。试验分为５组，每组设３个重复。饲喂至１０天，又选出１、５配方进行重复试验。对４、７、１０天乳鸽的体重进行显著性检验，同时用与试验组同鸽场自然哺育的乳鸽的同日龄体重作对照。结果显示：在４、７日龄时，各组间的增重差异不显著（Ｐ＞０．０５）；而１０日龄时，１组与２、３、４组差异极显著（Ｐ＜０．０１）；２组与４组差异显著（Ｐ＜０．０５）；１组与５组差异不显著（Ｐ＞０．０５）。从１０日龄乳鸽的增重效果看出；５种人工鸽乳中，１组的饲养效果最佳，４、５组次之，２组最差。而试验组全群（１７０只）乳鸽的成活率平均为９３．５％，１组成活率为１００％。试验结果表明：乳鸽完全可以脱离亲鸽而进行人工喂养，乳鸽出壳至１０日龄生长所需的最佳能量和蛋白需要分别为１５．３８ＫＪ／kg和５３．３％（以干样计）。