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以栓皮栎叶片为试材,采用单因素试验设计对栓皮栎ISSR反应条件进行系统优化,建立了栓皮栎ISSR的最佳反应体系和扩增程序。结果表明:PCR反应体系总体积为25μL,其中10×Buffer 2.5μL,30ng模板DNA,1.5UTaq聚合酶,2.5mmol/L Mg2+,0.6μmol/L引物,0.3mmol/L dNTPs;扩增程序:94℃预变性1min;94℃变性30s,51.5~59.0℃退火60s,72℃延伸2min,35个循环;最后72℃延伸5min。在此条件下从100条ISSR引物中筛选出12条多态性好、稳定性高的引物对陕西省天然群体共22个栓皮栎个体的DNA进行扩增,共得到166个位点,其中142个为多态位点,多态位点百分率为85.54%,Nei指数为0.2928,Shannon信息指数为0.4381,表明栓皮栎的遗传多样性处于较高水平。 相似文献
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