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三角紫叶酢浆草叶色变异株系的RAPD和ISSR标记初步鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
以三角紫叶酢浆草叶色变异株系和其野生型植株为材料,对其遗传物质进行分子水平上的初步检测。采用DNA混合样本池法,构建变异型样本池和野生型样本池,并以这两个DNA池做模板分别进行RAPD-PCR和ISSR-PCR 扩增。从70个RAPD随机引物和100个ISSR随机引物中分别筛选出2个RAPD特异引物(S76,S118)和2个ISSR特异引物(UBC818,UBC868),均能在上述两个DNA池之间扩增出稳定的差异性条带共6条。其中,变异株系的差异性缺失带S118 700-800测序成功,其序列包含编码叶绿体光系统Ⅰ第Ⅶ亚基的基因。研究结果表明,与其野生型相比,该叶色变异株系的确发生了遗传物质的变化,且在一定继代范围内能通过无性繁殖方式稳定存在。 相似文献
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三角紫叶酢浆草ISSR反应体系的建立与优化 总被引:3,自引:0,他引:3
采用正交设计直观分析法,对影响三角紫叶酢浆草ISSR-PCR反应较大的5个因素(Mg2+、Taq酶、引物、模板DNA、dNTP)在5个水平上进行优化实验;从100个随机引物中筛选出适宜的引物,并筛选出其最佳退火温度;最后对反应程序进行优化。由此首次建立了适合三角紫叶酢浆草的ISSR-PCR反应体系:25 μL反应液中含10×buffer 2.5 μL,Mg2+ 1.25 mmol/L,Taq酶0.9 U,引物0.3 μmol/L,模板DNA 60~100 ng,dNTP 0.25 mmol/L。反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性50 s,退火时间60 s(根据不同引物选择对应最佳退火温度),72℃延伸1.5 min,循环40次;72℃延伸7 min,4℃保存。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术研究酢浆草属植物提供理论依据和技术参考。 相似文献
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