广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药表型差异性分析

为调查广西不同养殖模式的猪源大肠杆菌耐药表型差异,为合理使用抗菌药物防治猪大肠杆菌病和减缓耐药菌株产生提供参考,采用体外分离培养和体外药敏试验的方法,分离了广西不同养殖模式的猪源大肠杆菌,并进行耐药表型检测和差异性分析。结果显示,大规模养猪场、中小规模养猪场和散养户的猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星的敏感率高于70%,而对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、利福平、林可霉素和复方新诺明的耐药率均高于90%。大规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星的耐药率极显著低于散养户(P<0.01),对氧氟沙星、庆大霉素和氟苯尼考的耐药率显著低于散养户(P<0.05);中小规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星、强力霉素和氟苯尼考的耐药性显著低于散养户(P<0.05);散养户大肠杆菌对环丙沙星、卡那霉素和壮观霉素的耐药率极显著高于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01),而对头孢噻肟的耐药率极显著低于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01)。大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户大肠杆菌的多重耐药指数(MARI)分别为0.62、0.63和0.68。14～23耐,散养户(44株)极...     

广西首例猪圆环病毒3型的发现及其衣壳蛋白序列分析

[目的]明确猪圆环病毒3型(Porcine circovirustype 3,PCV3)在广西猪群中的致病性及流行病学特点,为有效防控其暴发流行提供参考依据.[方法]采用PCR对广西某猪场腹泻死亡仔猪的病料样品进行PCV3检测,并对其唯一结构蛋白质(Cap)的结构进行同源模拟,构建遗传进化树;同时在线(http://www.cbs.dtu.dk/services/)预测Cap蛋白信号肽、糖基化位点和B细胞抗原表位.[结果]在广西某猪场腹泻死亡仔猪的病料样品中检测到PCV3.PCR扩增产物经核苷酸序列测定分析后截取Cap基因序列(645 bp),命名为PCV3/CN/Guangxi001/2017.PCV3/CN/Guangxi001/2017与13株国内PCV3毒株和5株美国PCV3毒株的Cap基因序列同源性分别在96.9%~99.4%和98.3%~99.5%,属于3b亚群;而与PCV1毒株和PCV2毒株的核苷酸序列同源性只有43.0%和45.8%,且B细胞抗原表位差异明显,在PCV1特有的B细胞抗原表位(92~103 aa)、PCV2特有的B细胞抗原表位(69~83 aa、117~131 aa和231~233 aa)及PCV1、PCV2共有的B细胞抗原表位(156~162 aa和179~192 aa)均无相似性.[结论]广西猪群中已存在PCV3感染,鉴于PCV2与PCV3间无交叉免疫保护特性,实际生产中应通过加强清洁消毒、灭鼠杀虫、定期监测、自繁自养等生物安全措施防控PCV3暴发流行.     

氟苯尼考耐药基因floR LAMP检测方法的建立及应用

为建立快速、灵敏且可定量检测氟苯尼考耐药基因floR的环介导等温扩增方法(LAMP),根据GenBank登录的革兰阴性菌floR基因保守序列,利用PrimerExploerV4设计特异性LAMP引物,成功建立了快速检测氟苯尼考耐药floR基因的LAMP方法。该LAMP检测方法反应温度为63℃,反应时间为60min,具有可实时监测反应、定量检测出floR基因的拷贝数,以及操作简便的特点,灵敏度高,检测限为6.24×100拷贝,是普通PCR的100倍。用建立的方法检测对氟苯尼考不同敏感性的大肠埃希菌floR基因,结果显示,对氟苯尼考敏感、中介和耐药的菌株均检测到floR基因,其拷贝数与菌株MIC相关,提示floR基因不仅存在于氟苯尼考耐药菌中。所建立的floR基因LAMP检测方法可为floR基因的监测,以及氟苯尼考耐药性产生和传播机制的研究提供新的技术手段。     

激光照射对丹参愈伤组织中丹参酮ⅡA含量的影响

[目的]探索激光照射丹参（Radix Salviae Miltiorrhizae）愈伤组织对丹参酮ⅡA含量积累的影响。[方法]以不同强度的激光分不同的时间,对丹参愈伤组织进行照射,后将丹参愈伤组织置于培养室中培养60d,采用HPLC法检测各处理中丹参酮ⅡA的含量,将处理组与对照组进行比较。[结果]各处理组与对照组中丹参酮ⅡA含量没有明显差异。[结论]激光照射对丹参愈伤组织中丹参酮ⅡA含量的积累没有明显促进作用。     

高职艺术设计类专业“工作室制”人才培养模式探索与实践

根据高职院校艺术设计类专业人才培养的特点,提出"工作室制"人才培养模式。深入探索"以工作过程为导向"的"工作室制"教育理念的人才培养模式,构思工作室的组建、运行、教学方式及现实意义,提出艺术设计类教学课程革新与发展新思路,创新高职艺术设计类教学工学结合与校企合作的新模式。     

猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立及应用

建立一种能够同时快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重PCR方法,为猪圆环病毒病的快速诊断及流行病学的研究提供技术支持。根据Gen Bank中报道的PCV2和PCV3毒株全基因序列,在建立各病毒单项PCR检测方法的基础上,筛选双重PCR反应的最佳条件。扩增两种病毒的片段分别为1 154 bp和649 bp。建立的PCV2/3双重PCR检测方法的最佳退火温度为55℃,最佳引物终浓度为1. 0pmol/μL。应用建立的双重PCR方法和单项PCR方法分别对73份临床猪病料进行PCV2和PCV3检测,对结果进行对比分析,结果显示两者的符合率为100%。经初步临床应用,所建立的双重PCR检测方法可用于对PCV2和PCV3的同时鉴别检测。     

广西畜禽产品中沙门氏菌血清型、耐药性及耐药基因调查

试验旨在了解广西部分地区畜禽产品中沙门氏菌血清型分布和耐药状况,以及β-内酰胺酶blaTEM、blaCTX-M基因和氟喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ⅰb-cr的流行情况。对沙门氏菌进行分离鉴定与血清型分型,采用K-B纸片法对其中随机挑选的80株分离株进行24种抗菌药物敏感性试验,并采用PCR方法进行耐药基因检测。结果显示,从零售生鲜畜禽肉中分离的176株沙门氏菌分属5个血清群,共26种血清型,主要优势血清群为B群60.23%(106/176)、E群18.75%(33/176)和C群15.91%(28/176),主要优势血清型为德尔卑沙门氏菌35.23%(62/176)、鼠伤寒沙门氏菌11.93%(21/176)和伦敦沙门氏菌9.66%(17/176)。80株分离株对24种抗菌药物均产生不同程度的耐药,其中对复方新诺明、林可霉素、利福平的耐药率最高,均高于90.00%,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、强力霉素、头孢拉啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢他啶、头孢噻肟、阿奇霉素的耐药率介于50.00%~90.00%之间,对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考的耐药率小于10.00%;所有分离株均为多重耐药株,其中最少为2重耐药,最多为17重耐药,多重耐药性主要集中在10~16重耐药,共占总数的78.75%(63/80)。PCR结果显示,80株分离株各基因的检出率分别为:blaTEM98.75%(79/80)、blaCTX-M26.25%(21/80)、oqxA26.25%(21/80)、oqxB21.25%(17/80)、qnrA16.25%(13/80)、aac(6′)-Ⅰb-cr 50.00%(40/80)。结果表明,广西畜禽产品源沙门氏菌血清型呈多样性分布,分离株的耐药情况严重,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

应用PCR技术鉴定猪源隐秘杆菌的感染

隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes,A.pyogenes),又名化脓放线杆菌,是一种多形态、无运动性的革兰阳性杆菌.Ramos[1]根据16S rRNA基因进行系统进化分析后将其分类到隐秘杆菌属.该菌常导致牛[2]、羊[3]和猪发病[4],表现为肺炎、关节炎[5-6]等.近年来,猪场发病的病因及病原致病机理呈复杂趋势,尤其断奶仔猪肺炎和腿部疾病也越来越明显,不但影响猪的生长性能,而且降低肉猪的商品价值.2011年7月～2012年3月,广西兽医研究所细菌研究室在开展副猪嗜血杆菌病流行病学调查时发现,广西南宁市、贵港市和玉林市分别有3个规模猪场断奶仔猪零星出现以体温升高、关节炎、少量淡黄色稀薄脓汁、心包炎,部分死亡小猪肺部有小坏死灶为主要特征的疾病,临床症状与副猪嗜血杆菌病、链球菌病相似.此外,南宁市和贵港市的两个猪场曾免疫过副猪嗜血杆菌商品苗,但免疫效果不佳.最后,经过PCR鉴定确诊3起病例均由猪源隐秘杆菌引起,报告如下.     

副猪嗜血杆菌实时荧光PCR快速检测方法的建立和应用

[目的]建立一种快速准确定量检测副猪嗜血杆菌（HPS）的检测方法。[方法]根据GenBank公布的副猪嗜血杆菌16 S rRNA基因序列,选择其保守区域设计1对特异性引物。通过优化引物浓度和退火温度,建立快速定量检测副猪嗜血杆菌的实时荧光PCR方法,并评价了其特异性和稳定性。[结果]建立的实时荧光PCR方法最低检测限是50拷贝/μl,重复性好,变异系数均小于2%。该方法特异性强,只能检测副猪嗜血杆菌,不能检测到猪链球菌2型、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌DH5α和猪伤寒沙门氏菌。采用该方法对10份临床疑似HPS感染样本进行检测,其结果与细菌分离培养和常规PCR的结果一致。[结论]建立的实时荧光PCR方法快速、灵敏、特异、重复性高,可用于HPS感染的临床快速检测。     

新城疫纳米乳疫苗研制及其免疫效力试验

研制新城疫纳米乳疫苗,并考察其免疫效果。利用伪三元相图法优选配方,并考察其结构类型、形态粒径、稳定性、安全性及免疫效果。结果表明:新城疫纳米乳疫苗为W/O型,澄明均一,乳滴呈球形,平均粒径364 nm;稳定性良好;注射、口服接种安全;每只0.751、.0 mL免疫剂量可产生良好的免疫效果。新城疫纳米乳疫苗安全、稳定、免疫效果好,具有临床应用前景。