ETR1靶向RNA干扰重组体的构建及序列分析

[目的]构建拟南芥乙烯受体(ETR1)特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体。[方法]从ETR1基因cDNA序列上选取目标序列,设计2对引物,经PCR扩增得到正反向2个DNA片段(S5I和AI),构建含有该正反向互补重复序列DNA片段的中间载体,测序分析正确后再克隆到植物表达载体pCAMBIA1301中的Gus位置并经双酶切证实。[结果]ETR1基因S5I和AI片段被成功克隆进质粒pCAM-BIA1301中,酶切鉴定及测序分析显示,重组质粒shRNA编码序列与设计片段的序列完全一致。[结论]ETR1靶向RNA干扰重组体的成功构建,为进一步获得拟南芥乙烯受体基因的功能缺失突变体奠定良好基础。     

定性PCR方法检测转基因玉米MON810转化事件的研究

转基因玉米MON810(Yield Gard R)是孟山都公司通过DNA重组技术和微注射轰击研发的一种具有对欧洲玉米螟(ECB;Ostrinia nublialis)有特殊抗性的转基因玉米品系,目前在世界各地已经得到广泛种植,为加强对该品系玉米的安全管理,本研究旨在建立MON810品系玉米的转化事件特异性定性PCR检测方法。根据MON810的插入序列信息,在3′端的侧翼序列处设计定性PCR检测的引物,检测MON810在其他几种常见转基因作物混合样品的特异性。结果表明,该方法具有很好的特异性。同时检测该引物系统的扩增灵敏度,结果表明,检测引物的灵敏度可达0.1%。建立的MON810特异定性PCR检测方法经全国7家实验室的验证,进一步证实该方法能够特异地检测出样品中的MON810转化事件,检测方法的灵敏度可达0.1%,且检测结果具有良好的可重复性和可重现性。MON810转化事件定性PCR检测方法的建立可满足于抗虫转基因玉米MON810及其衍生品种生物安全管理的需要。     

入世对农用车是利大于弊

入世后,国外农用车对我国农用车的发展会产生怎样的影响?一些农用车经销商认为,利大于弊,在农用车产品质量升级与维护服务方面,还将产生很大的推动作用。     

若干定性PCR方法部颁标准在检测转基因混合样品中的应用分析

以若干定性PCR方法部颁标准对含有0.5％的4份不同转基因混合样品进行检测,先以通用元件标准中的CaMV35s启动子、NOS终止子对混合样品进行初步定性PCR筛选。结果表明,4份样品中都含有转基因成分。Bt基因特异性标准检测表明,3#和4#样品含有转基因抗虫水稻成分。构建特异性标准PCR检测表明,2#、3#和4#样品含有转基因GTS-40-3-2大豆成分。以MON810、Bt176、NK603转化体事件标准进行品系特异性PCR检测,结果证实：1#和4#样品中含有Bt176转基因玉米成分;3#样品中含有Mon810转基因玉米成分;4份样品中均不含NK603转基因玉米成分。说明农业部颁布的定性PCR方法标准能满足于对多种转基因混合样品的检测,且检测结果准确,可靠。     

川渝地区野生鹅观草种质资源形态多样性研究

对采自四川及重庆地区不同采集地的26份鹅观草(Roegneria kamoji Ohwi)材料的24个形态学性状进行了观察分析.结果表明:该物种在形态学上具有丰富的遗传多样性(H′=1.955).遗传多样性指数分析表明,遗传多样性主要集中在材料内(64.48%),材料间的遗传变异为35.52%.从单份材料上看,鄷都新城材料具有最高的遗传多样性(H′=1.382).聚类分析将26份材料分为4类,聚类结果与其地理分布和采集生境存在一定的关系.主成分分析表明:穗节节间长、第2颖长、外稃芒长、花序长、旗叶宽、外稃宽和小穗小花数7个性状是解释川渝地区野生鹅观草多样性的重要性状,支持聚类结果.还探讨了鹅观草的保护及其利用.     

广东雷州杂草稻黑壳基因Bh4和红皮基因Rc的基因型鉴定

为测定雷州杂草稻的黑色颖壳基因Bh4和红色果皮基因Rc的基因型,本研究对雷州10个杂草稻群体的100个单株的种子的颖壳和果皮颜色进行表型观察,同时通过PCR扩增及序列分析对Bh4和Rc的基因型进行鉴定。结果表明,雷州杂草稻中黑色颖壳和黄色颖壳的种子几乎各占一半,果皮颜色则以红色为主,有少量白色和浅红色果皮的种子。雷州杂草稻的Bh4和Rc的基因型与表型鉴定结果一致。57份黑色颖壳杂草稻的Bh4基因型为39个野生型和18个杂合型,25份黄色颖壳和18份黄色带黑斑颖壳杂草稻的Bh4基因型均为缺失22 bp的突变型;90份红色果皮杂草稻的Rc基因型为73个野生型和17个杂合型,4份白色和6份浅红色果皮杂草稻的Rc基因型均为缺失14 bp的突变型。本研究为分析雷州杂草稻的Bh4和Rc基因的来源提供了分子基础。     

超声检查在小儿便血病因诊断中的应用

目的:探究超声检查在小儿便血病因诊断中的应用价值。方法:选取吉水县人民医院便血患儿28例,均采用超声检查,分析患儿发生便血的具体病因,并与术中或病理结果对比,研究超声检查的诊断准确率和临床应用价值。结果:经超声检查发现,28例患儿中5例超声检查显示阴性,其中白血病1例,原发性血小板减少性紫癜2例,另2例有肠炎病史;其余23例患儿中包括美克尔憩室3例,结肠息肉4例,肠套叠6例,绞窄性肠梗阻5例,肠重复畸形2例,过敏性紫癜1例,坏死性小肠结肠炎2例;各类型患儿超声检查结果与术中和/(或)病理学诊断结果相比,诊断准确率分别为66.6%、75.0%、100.0%、100.0%、50.0%和100.0%、50.0%。结论:采用超声检查小儿便血,可有效提高患儿病因检出率和诊断准确率,临床应用价值高。     

农杆菌介导的香蕉枯萎病菌4号生理小种转化体系的优化

香蕉枯萎病是世界范围内香蕉种植区最为严重的病害之一,严重威胁和影响着香蕉产业的发展。本文针对香蕉枯萎病病原菌的4号生理小种,建立了农杆菌介导的转化体系,确定了影响转化效率主要因子的优化体系是:农杆菌在IM培养基诱导前农杆菌OD600为0.15、农杆菌经IM液体培养基诱导的时间为7h、乙酰丁香酮(AS)浓度为150μmol/L、Focr4孢子浓度为1×106个/mL、共培养时间为48h、培养温度为25℃、诱导培养基pH值为5.5。在此条件下,转化效率能达到700～800个转化子/106个香蕉枯萎病菌孢子。PCR验证表明外源的T-DNA已经成功随机地整合到该病原菌基因组中。目前,应用该转化体系已获得2300多个转化子,为后续克隆相关致病基因打下了良好基础。     

昆虫杆状病毒杀虫剂研究与应用综述

综述了对野生型昆虫杆状病毒和重组昆虫杆状病毒杀虫剂的研究进展,以及我国昆虫杆状病毒杀虫剂的应用研究现状。     

原核表达Cry3Aa蛋白对椰心叶甲的杀虫活性

椰心叶甲是近年来传入我国的危险性有害生物,严重危害了我国海南省、广东省、台湾省和香港地区的椰子、槟榔等棕榈科植物,并有蔓延趋势,。Bt Cry3Aa毒蛋白对鞘翅目害虫有较强的杀虫活性。本研究首次发现大肠杆菌原核表达的Cry3Aa重组蛋白对椰心叶甲成虫具有快速杀灭作用,工程菌表达的包涵体重组蛋白处理叶片,饲喂椰心叶甲成虫,浓度为2．0mg／mL时,24h内死亡率为100％。一次性饲喂处理24h、48h和72h的LC50分别为0．7516mg／mL、0．4755mg／mL和0．3714mg／mL,连续性饲喂即使低浓度也达到较高死亡率。本试验结果为cry3A口基因在转基因技术方面的应用或研发生物农药防治椰心叶甲害虫提供了重要的理论与技术支撑。