西藏小麦雪霉叶枯病发生初报

雪霉叶枯病[Gerlachia nivalis(Ces.exSacc.)Gams and Mll.=Fusarium nivale(Fr.)Ces.ex Sacc.]是气候冷凉地区冬小麦成株期的一种常发病害,我国西北地区和四川、贵州等省均有分布。     

稻瘟菌产孢培养基的筛选

采用随机区组多因素分析法对三种增减基产孢结果进行分析,结果表明在相同条件下,不同菌株之间产孢量存在显著差异。三种培养基中以燕麦片培养基产孢效果最好。但米糠培养基具有产孢效果好,成本低、操作简便的优点则实验室条件下大量培养稻瘟菌分生孢子的首选培养基。     

IgM型单克隆抗体之scFv库的建立与筛选

从一个抗脂磷酸聚糖IgM型单克隆抗体细胞的mRNA中经RT-PCR克隆重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),然后将VH、Linker和VL连接成scFv,并克隆到载体pCANTAB-5E,转Escherichia coliTG1感受态细胞,构建了单链抗体库。通过辅助噬菌体M13KO7感染后,使单链抗体展示在噬菌体衣壳蛋白pIII的N端,得到噬菌体展示的抗体库。将抗体库用于"淘洗—富集—扩增"3轮以后,得到针对脂磷酸聚糖特异性的噬菌体抗体。测序结果表明,该scFv的VH基因序列全长390 bp,编码127个氨基酸;VL基因序列全长341 bp,编码113个氨基酸。二者均符合小鼠免疫球蛋白可变区基因特征,含有4个框架区(FR)、3个抗原互补决定区(CDR)及抗体特征性的2个半胱氨酸残基。     

阴沟肠杆菌（Enterobacter closcae）对乐果降解特性的研究

从福建省福农生化有限公司排污口的土壤中筛选到一株对乐果有较好降解效果的菌株阴沟肠杆菌,为了使该菌能更好的应用于乐果残留污染的治理当中,采用室内培养方法,对该菌降解乐果的作用因素进行研究.结果表明,菌降解乐果的最佳温度为35℃、pH为8.0、装液量50 mL·250 mL-1、摇床振数180 r·min-1、C源为果糖、N源为酵母浸膏、接种苗OD265为0.065、底物浓度为200 mg·L-1,对应的降解率在28.84%～61.19%之间,采用L18(2×37)正交法及DPS数理统计得出Cu2+、Fe2+对菌降解乐果有显著的促进效果,Cd2+、Zn2+则在溶液中含量低水平时促进降解,高水平时抑制降解;Mg2+、Ba2+、Mn2+、Pb2+等离子对菌降解乐果无促进作用.     

rep-PCR法对稻瘟病菌有性后代随机群体的评价

构建稻瘟病菌有性后代随机群体是研究目的基因遗传特点，乃至克隆目的基因的重要基础，但是在建立有性后代随机群体时，可能会有无性后代污染。采用先分离单个子囊，待其长成菌落并产生分生孢子后，再分离单个萌发的分生孢子的方法构建稻瘟病菌有性后代随机群体。利用基于重复DNA序列Pot2的rep-PCR方法对分离得到的有性后代进行DNA指纹分析，并评价构建的稻瘟病菌有性后代群体的质量。结果表明，构建的有性后代随机群体共包含176个后代。每个后代个体的DNA指纹图谱均与两亲本的DNA指纹图谱不一致；有性后代之间的DNA指纹图谱也彼此不一样，说明得到的有性后代个体都是由子囊孢子萌发形成的，且分离自不同的子囊。GUY11的rep-PCR扩增片段中的5个特异性片段的分离比例也都符合1:1的期望值，是按单个位点标记分离的，与已知的结果相吻合，说明有性后代随机群体的质量较高，不存在偏离现象，是一个较为理想的群体。同时，研究结果还得出基于Pot2的rep-PCR方法可以用来快速评价稻瘟病菌有性后代群体的质量。     

稻瘟病菌一个假定的α-1,2-甘露糖苷酶生物信息学分析

对稻瘟病菌一个假定的α-1,2-甘露糖苷酶MgManⅠ生物信息学进行分析的结果表明,该蛋白与海枣曲霉、桔青霉等丝状真菌的已知α-1,2-甘露糖苷酶(EC 3.2.1.113)氨基酸序列具有高度同源性,并具有其相同的活性中心位点.基序分析表明,该蛋白可能含有4个N-糖基化位点、3类19个磷酸化位点和12个N-肉豆蔻酰位点.该蛋白的相对分子质量预测为58.2 ku,理论等电点pI为5.17,并且为细胞外分泌蛋白,信号肽剪切位点为21A和22S之间.系统发育分析表明:MgManⅠ与丝状真菌中的海枣曲霉、桔青霉α-1,2-甘露糖苷酶之间亲缘关系最近,形成一大类;动物的α-1,2-甘露糖苷酶与植物的α-1,2-甘露糖苷酶分别聚成二大类;酿酒酵母α-1,2-甘露糖苷酶ScManⅠ与丝状真菌不同,单独成为一类.进一步以已知结构的PcManⅠ为模板,通过同源建模得到的三维结构图形基本反映了MgManⅠ的空间构象,为深入研究该蛋白的生化特性和生物学功能奠定了基础.     

MoHRD3基因参与调控稻瘟病菌的生长发育和致病力

 稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)作为主要的农业病原微生物,其引起的稻瘟病严重威胁着水稻等谷类作物的生产安全。内质网相关蛋白质降解途径(Endoplasmic reticulum-associated protein degradation, ERAD)是生物体应答内质网压力的主要方式之一,其在机体生长发育过程中具有重要作用。而HRD(HMG-CoA reductase degradation)复合物作为ERAD的关键组分,主要由Hrd1、Hrd3、以及凝集素Yos9等蛋白组成,负责内质网中错误折叠蛋白的识别、转运以及泛素化过程,最终由蛋白酶体降解,从而有效缓解内质网压力,保证细胞的正常生理活动。有研究表明,Hrd3属于单次跨膜蛋白,在内质网腔中与Hrd1、Yos9相结合,负责底物的识别并起着稳定Hrd1的作用。目前Hrd3在稻瘟病菌中的生物学功能尚不清楚。本研究通过基因敲除及互补试验获得了稻瘟病菌的ΔMohrd3突变体和ΔMohrd3-C回补菌株,并以野生型为对照,对突变体的生物学表型进行了分析。结果显示,ΔMohrd3突变体的生长速率、产孢量明显下降;对大麦和水稻的致病力显著减弱。进一步胁迫试验表明,MoHRD3的缺失导致稻瘟病菌对外界盐胁迫、渗透压胁迫的耐受性增强,对内质网胁迫耐受性减弱,而对细胞壁胁迫无明显变化。同时,MoHRD3基因的缺失激活了未折叠蛋白响应途径(Unfolded protein response, UPR)。上述结果表明,MoHRD3参与调控稻瘟病菌的营养生长、无性繁殖、致病及对不同环境胁迫的响应过程。     

福建病圃与大田稻瘟菌群体遗传谱系和毒性类型的比较

用rep-PCR方法分析了病圃和大田的稻瘟菌的遗传谱系组成,并在CO39NILs6个近等基因系品种上进行毒性类型分析。结果表明,不同群体之间的遗传谱系和毒性类型均不完全相同,福建稻瘟菌群体在年度间存在明显的优势谱系,1999、2000年的优势谱系均为CFL03,2001年为CFL07;两个季节中的谱系类型组成差异小,早季病圃和大田及晚季大田优势谱系均为CFL07。年度间病圃与大田的毒性类型组成和优势类型都有很大的变化,1999年病圃的优势毒性类型为I20.1,而2000年则为I24.1和I34.1两个类型;毒性类型I1.1、I5.1、I11.1、I26.1和I35.0只在1999年出现,而毒性类型I4.1和I14.1只在2000年出现。两个季节中病圃的毒性类型组成有所差异,早季有1个毒性类型(I35.1)在晚季未出现,晚季有4个毒性类型(I10.1、I31.1、I32.1、I21.1)在早季中未出现,优势毒性类型早季的I14.1变为晚季的I20.1,毒性类型组成也有很大差异,且晚季的比早季的丰富。     

稻瘟病菌MoYpt5蛋白互作网络预测

稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)共有11个假定的Rab蛋白家族成员,本文选取了MoYpt51(MGG_06241)和MoYpt52(MGG_01185)进行了生物信息学分析。通过搜索多个大型蛋白互作数据库和文献,共得到数百个与核心蛋白互作的蛋白和互作对。利用信息处理技术和高效制图平台将这些蛋白互作对构建成互作网络,得到若干个具有生物学意义的模块。结果表明,筛选得到的互作蛋白中,有的参与了蛋白降解的泛素途径(MGG_04053等)、囊泡介导的蛋白胞内运输(MGG_01238等),有的在蛋白、染色体的组装和修饰等过程(MGG_03677等)起重要作用。大部分假定互作蛋白定位于细胞质和质膜上,为其与目标蛋白互作提供了空间可能性。