大豆KTi基因和SBA基因双价RNAi表达载体的构建

本研究采用RT-PCR技术克隆大豆KTi和SBA基因的核心保守序列,序列分析表明,KTi基因片段为324bp,SBA基因片段为515bp;利用RNAi技术,结合种子特异性启动子,构建同时具有KTi基因和SBA基因反向重复结构的双价RNAi种子特异性表达载体pCAMBIA3301-KTi-SBA(pKTi-SBA)。通过酶切检测及测序,证明双价RNAi种子特异性表达载体构建成功。本研究为通过RNAi技术同时降低大豆种子中胰蛋白酶抑制剂和凝集素含量,改良大豆品质奠定基础。     

芦荟茎段芽的诱导与再生

以茎段为外植体,MS为基本基质,进行了芦荟无性快速繁殖技术的研究。结果表明:MS 6-BA2.0mg/L NAA0.15mg/L为最佳的芽诱导培养基,MS 6-BA4.0mg/L NAA0.1mg/L为最佳的继代培养基,MS NAA2.0mg/L 活性炭0.3%为最佳的生根培养基。     

大豆杂种后代蛋白质含量的遗传研究：Ⅱ.杂种后代的遗传分析

利用蛋白质含量不同的６个亲本的不完全双列杂交的Ｆ１，Ｆ２代资料，分析了蛋白质含量的遗传变异趋势及与其他性状间的相互关系。结果表明，双亲的蛋白质含量差异大，Ｆ２变异程度也大。蛋白质含量的遗传力较高，可在Ｆ２代选择并能获得一定的遗传进度，Ｆ１，Ｆ２代的蛋白地岑与母本的含量及双亲中亲值呈极显著的正相关。Ｆ２代的蛋白质含量与百粒重呈极显著的正相关，与脂肪含量呈极著的负相关。     

高产优质玉米新品种"吉玉301"选育报告

玉米新品种“吉玉301”是以自选系“GS01”为母本、外引系“吉853”为父本杂交育成的玉米单交种。2年区域试验平均产量为10022．0kg／hm2,比对照“四单19”增产12．5％;生产试验平均产量为10123．2kg／hm2,比“四单19”增产11．8％。该品种于2007年1月通过吉林省农作物品种审定委员会审定,其主要特点是稳产、高产、抗病、抗旱,品质好,适于吉林省长春、吉林、通化、白城等地区及黑龙江省部分地区种植。     

大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化

【目的】应用RNA干扰技术,同时抑制大豆凝集素(Soybean agglutinin,SBA)和脂肪氧化酶(Lipoxygenase,Lox)基因在种子中的表达,改良大豆营养品质,为培育优质大豆材料奠定基础。【方法】根据RNAi原理,酶切获得Lox目的片段,构建以除草剂Bar基因为筛选标记、种子特异性启动子P7αP启动SBA和Lox双干扰的pCAMBIA3301-SBA-Lox(pSBA-Lox)干扰表达载体,并通过农杆菌介导法转化大豆(品种为吉农28),采用PCR、Southern杂交和实时荧光定量PCR对转基因植株进行检测。【结果】质粒PCR和酶切鉴定结果表明,双价RNAi植物表达载体pSBA-Lox构建成功。将其转入到大豆中,对转化植株进行PCR、Southern杂交检测,结果显示,外源基因以单拷贝形式整合到植物基因组中,并能遗传给后代。T1代转基因植株的实时荧光定量PCR分析显示,转基因植株中SBA基因和Lox基因在籽粒中的表达量比未转化受体植株均明显降低,SBA基因表达量降低了35.9%~47.2%,Lox基因表达量降低了32.8%~56.1%,而在幼嫩叶片中的表达量相比对照植株变化不大。【结论】获得了大豆凝集素和脂肪氧化酶表达量均明显降低的T1代转基因大豆。     

麝香百合组培快繁技术初步研究

采用随机区组试验方法，以MS为基本培养基，对百合叶片进行了不同浓度的NAA和6－BA处理试验，探讨生长激素对百合成苗和增殖的作用，结果表明，以NAA0．1mg/L处理的成苗率和结鳞率最高，小苗长势最好；以6－BA2．0mg/L NAA0.2mg/L处理的增殖系数最高。     

BADH/pepB双价基因无选择标记表达载体转化苜蓿的初步研究

选用公农1号紫花苜蓿,以5～7d莆龄的无菌子叶为外植体,通过农杆菌介导法将含有甜菜碱醛脱氢酶(BADH)和酸性蛋白酶(pepB)双价基因的无选择标记表达载体导入苜蓿子叶中,并用含有Na2CO3和NaHCO3碱性盐溶液的培养基进行筛选,得到抗盐碱转化植株.碱性盐浓度48mmol/L宜于子叶愈伤诱导,有利于转化植株的获得.对转化植株进行PCR检测,初步证明目的基囚序列已经整合剑苜楷基因组中.移栽成活的13棵碱性盐抗性植株经PCR检测有3棵植株呈阳性.     

4种骨干玉米自交系幼胚愈伤组织诱导条件的优化

采用10种含有不同植物激素的愈伤组织诱导培养基,研究了4种骨干玉米自交系的愈伤组织诱导情况。结果表明,基因型对愈伤组织诱导率影响显著,且基因型和培养基之间存在互作;2,4-D对玉米幼胚愈伤组织的诱导是必需的,2.0～3.0mg/L的2,4-D大多能诱导出胚性愈伤组织;幼胚长为1.5～2.0mm时,玉米愈伤组织诱导率较高且质量较好;10mg/L的AgNO3可以明显提高愈伤诱导率,6-BA对愈伤组织的诱导率没有明显影响。     

大豆皂苷薄层色谱检测展开剂的改进

大豆皂苷是大豆中的一种生理活性成分,是由各种单体结构组成的。该文利用人参皂苷的薄层色谱展开剂进行改进,得到了适合大豆皂苷薄层色谱检测的展开剂配比,且各个单体分离效果比较好。具体配比是:氯仿/乙酸乙酯/甲醇/水=30/40/20/10,取下层液体,点样量也为2μL,展距为10cm,之后喷以10%的H2SO4-乙醇溶液显色,在365nm下观测。     

转抗虫基因Cry1Iem大豆的分子鉴定与功能验证

通过转抗虫基因来提高作物的抗虫性是一条有效途径,以此来提高作物的产量和品质。本研究以转抗虫基因Cry1Iem大豆的T2、T3株系作为试验材料,利用常规PCR检测、Southern杂交、荧光定量PCR技术对转抗虫基因Cry1Iem株系进行分子鉴定;同时对40个转基因阳性株系进行室内人工接虫、200个转基因阳性株系室外网室接虫并进行抗虫性鉴定。选取其中10个株系进行常规PCR检测,结果在T2、T3当中都检测到了Cry1Iem、Bar、启动子CaMV35S、Nos目标片段,表明目的基因已被顺利导入受体JN28大豆植株当中并得到了稳定遗传;选取其中5个T2、T3转基因株系进行Southern杂交,结果显示:目的基因以单拷贝的形式整合到了大豆基因组当中;荧光定量PCR检测结果表明,Cry1Iem基因在选取的3个转基因株系中均得到了表达,而在非转化的受体JN28当中未检测到荧光信号。室内抗虫性鉴定结果显示40个转Cry1Iem基因株系豆荚内活虫的成活数量明显低于受体材料JN28大豆豆荚内的活虫数量,表明转基因材料具有显著的抗虫性。室外抗虫性鉴定结果表明:JN28大豆受体植株的虫食率为6.72%,属于感虫品种;而200个转Cry1Iem基因株系的平均虫食率为3.81%,属于抗虫品系。本研究结果为中国转基因抗虫大豆新品种的选育提供部分参考数据。