甜瓜高效不定芽再生体系的建立

对8个基因型甜瓜再生能力进行研究,筛选出再生能力较强的基因型,并以其为材料对外植体类型,不定芽诱导、伸长和不定根诱导3个阶段植物生长调节剂的类型与质量浓度进行优化筛选,旨在建立甜瓜高效的不定芽再生体系。结果表明,不同基因型间再生能力存在差异,2个厚皮甜瓜基因型B8、P110和1个薄皮甜瓜基因型IVF05再生能力较强,其中B8再生效果最好;以B8材料为基础建立再生体系,发现不定芽诱导能力最高的外植体为子叶近胚轴端,不定芽诱导阶段最适的培养基为MS+1.0 mg·L^-16-BA+1.0 mg·L^-1ABA,不定芽诱导率96.7%;不定芽伸长和不定根诱导最适的培养基分别为MS+0.1 mg·L^-16-BA和1/2 MS+0.5 mg·L^-1IBA,获得的再生苗生根率达93.3%。     

农杆菌介导的厚皮甜瓜遗传转化体系的建立

【目的】遗传转化是进行基因功能验证的重要手段,构建较为完善、高效的厚皮甜瓜遗传转化体系,为基因功能验证和厚皮甜瓜种质改良提供技术支撑。【方法】以厚皮甜瓜B8为材料,用携带植物双元表达载体p QY002005的根癌农杆菌介导转化B8子叶诱导再生,通过探究影响甜瓜遗传转化过程中的重要因子的作用,建立以B8为基础的甜瓜遗传转化体系。【结果】以正常光周期培养3 d的无菌苗子叶节为外植体,对其进行微刷+10 s超声处理可提高农杆菌侵染效率,荧光芽获得率达29.6%;压力85 kPa的2次5 min的抽真空侵染方式(间隔1 min)侵染效果较佳;4 mg·L^-1的Basta较适宜筛选抗性植株。利用以上方法,单次转化120个子叶节外植体,可获得31个再生荧光芽,17株生根苗,通过PCR检测确定8株阳性苗,阳性率达58.8%,阳性植株获得率为6.7%。【结论】成功建立了以B8为材料的甜瓜高效遗传转化体系,为甜瓜关键基因功能验证和种质精准改良提供技术支持。