应用DTBIA技术快速检测柑橘黄龙病菌研究

柑橘黄龙病病原菌为韧皮部限制性寄生菌Candidatus Liberibacter,迄今为止尚未成功获得离体纯培养。因此基于特异性抗体的高通量血清学检测技术迄今尚未开发。本实验室前期研究利用异源表达重组黄龙病菌外膜蛋白Omp_(CLas)免疫动物,制备并获得了特异性多克隆抗体(Anti-Omp_(CLas)-Pab)。本研究利用直接组织印迹免疫法(Direct tissue blot immunoassay,DTBIA)技术对获得的多克隆抗体的检测效果进行了初步评价,证实该抗体可以特异性识别中国不同地理来源的柑橘黄龙病菌分离物;柑橘叶柄、叶片中脉、枝条、根部、果梗和种子中均存在黄龙病菌,其中根部和种子中的病菌含量相对较低,枝条和叶片中脉中的含量较高。该多克隆抗体的获得为后续快速检测试剂盒或试纸条的研发奠定了基础。     

一种新的柑橘采后病害病原的鉴定

从疑似青霉、绿霉症状的甜橙（Citrus sinensis）果实样品中分离得到一株新的致病菌株Pu. XHz。该菌株在PDA培养基上形成白色圆形菌落,产生大量蓝灰色分生孢子,培养后期有液滴渗出;在察氏培养基（Czapek–Dox Medium,CA）上菌落呈烟花绽放状;在察氏酵母膏琼脂培养基（Czapek Yeast Autolysate agar,CYA）上菌落呈同心圆状;在25%甘油硝酸盐琼脂培养基（25% Glycerol nitrate agar,G25N）上白色菌丝体发达,不产生分生孢子。分生孢子大小为（4.48 ~ 8.37）μm ×（2.65 ~ 5.24）μm,大部分为长椭圆形。致病性测定结果表明,在金钱橘、茂谷柑和甜橙果实上接种3 d左右开始出现水渍状病斑并逐渐扩大,接种12 d左右在病斑中央产生许多特征性晶须状霉层（Whisker mold）,为病原菌的孢梗束,其顶端产生大量蓝灰色分生孢子。ITS序列分析表明,Pu. XHz与日本菌株Penicillium ulaiense SU-9分离物同源性为99%,证实了P. ulaiense是导致柑橘果实采后霉状腐烂的病原菌,为进一步研究由其引起的发病规律奠定了基础。