不同矮化中间砧对烟富3号苹果幼树叶片内源激素及糖含量的影响

【目的】研究不同矮化中间砧对烟富3号苹果幼树叶片内源激素及糖含量的影响,筛选出最适合静宁地区发展的烟富3号苹果砧穗组合。【方法】以烟富3号为接穗,以西府海棠为基砧,以M26、GM256、P16、P2、M27、T337、SH40、SH6和M9为中间砧,定植3 a（年）后调查树体生长指标,然后测定其叶片中ZT、GA3、IAA、ABA、蔗糖、果糖、葡萄糖、山梨糖醇的含量。【结果】P16作为烟富3号的矮化中间砧时,株高最小,ZT含量最高;P2作为烟富3号的矮化中间砧时,节间长最短,ABA含量最高,IAA/ABA和（ZT+IAA+GA3）/ABA的比值最小;以P16为烟富3号的矮化中间砧时,叶片中果糖与葡萄糖含量最高;以T337为烟富3号的矮化中间砧时,叶片中山梨糖醇与蔗糖含量最高。相关性分析发现株高、茎粗和节间长与ABA含量均呈负相关,节间长与IAA/ABA和（ZT+IAA+GA3）/ABA的比值呈正相关。【结论】P2和P16作为烟富3号的矮化中间砧时,树体生长量最小,叶片中的ABA含量显著高于其他砧穗组合,IAA/ABA和（ZT+IAA+GA3）/ABA的比值最小,说明P2和P16矮化性在9...     

‘南通小方柿’赤霉素不敏感基因DkGAI2的克隆与功能分析

【目的】 对DkGAI2的亚细胞定位及表达特性进行分析,并将DkGAI2转化烟草,分析转基因烟草的生理和形态指标,为GAI的深入研究提供理论基础。【方法】 以‘南通小方柿’高通量转录组测序结果中标注的GAI2为原始序列（未发表）,利用RT-PCR,3′ RACE和5′ RACE技术从‘南通小方柿’中克隆得到DkGAI2的序列全长。利用生物信息学分析其序列特征,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析DkGAI2在‘大方柿’及‘南通小方柿’5个不同物候期的表达特性以及DkGAI2在‘南通小方柿’不同组织中的表达特性,构建瞬时表达载体pCAMBIA-GFP-1302-DkGAI2,并瞬时侵染烟草分析DkGAI2的亚细胞定位,通过构建DkGAI2植物双元表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草,经过GUS染色、RT-PCR对转基因烟草株系进行鉴定;并将野生型和转基因烟草移栽,于第一朵花开放时测定转基因植株的株高、节间长度、叶片长宽比以及GA₁和GA₄含量。【结果】 从‘南通小方柿’中克隆得到了1 827 bp的DkGAI2,DkGAI2核苷酸序列与猕猴桃（KF588651.1）、光皮烨（MF149049.1）、砂梨（KX078214.1）、苹果（FJ535245.1）、葡萄（MG738718.1）的相似度达72%-80%,DkGAI2具有DELLA蛋白家族特有的DELLA结构域,属于DELLA蛋白基因家族。DkGAI2编码608个氨基酸,相对分子质量为66.5 kD,理论等电点为5.54,不稳定系数为50.41,无明显疏水区,无跨膜区,无信号肽。序列系统进化分析结果显示,DkGAI2与葡萄亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示,DkGAI2在‘南通小方柿’5个不同物候期的表达量都高于‘大方柿’;DkGAI2在‘南通小方柿’不同组织中表现出组织表达特异性,其中,在老叶中表达量最高,其次为茎尖和幼叶,而在幼果中几乎不表达。pCAMBIA-GFP-1302-DkGAI2融合蛋白的绿色荧光信号位于细胞核中,表明DkGAI2编码蛋白位于细胞核。经过GUS染色和RT-PCR检测,共获得5个转DkGAI2烟草株系,转基因烟草叶片GA₁含量增加,GA₄含量降低,GA₁和GA₄总含量降低,且转基因烟草植株出现植株矮化、节间缩短、叶片长宽比降低及花期延迟的表型。【结论】 DkGAI2具有组织表达特异性,定位于细胞核,DkGAI2在‘南通小方柿’5个不同物候期的表达量均高于‘大方柿’。推测DkGAI2可能通过降低GA₄的含量进而引起植株矮化。