北沙参内生真菌多样性研究

对北沙参内生真菌类群组成及多样性进行分析。结果表明,从北沙参植株中分离到内生真菌137株,利用ITS-r DNA序列分子鉴定法将北沙参生真菌鉴定为21个分类单元,分布在6纲8目11科21属。河北安国北沙参内生真菌归于10个属,内生真菌的多样性指数H=1.08、D=0.90,优势菌群为链格孢属(Alternaria)真菌,占总菌株数的29.93%;山东烟台北沙参内生真菌归于17个属,内生真菌的多样性指数H=1.31、D=0.94,以刺盘孢属(Colletotrichum)和链格孢属(Alternaria)真菌为优势菌群,分别占总菌株数的19.71%和13.87%,两地北沙参内生真菌种类的相似性系数Cs=0.57。由此可见,两地北沙参内生真菌组成具有一定的相似性,山东烟台北沙参内生真菌多样性高于河北安国北沙参。     

承德两种野生食用菌的分子鉴定及系统发育分析

以承德红蘑和白蘑子实体为试材,采用真菌通用引物ITS1和ITS4,对其基因组rDNA基因的ITS区段进行PCR扩增、克隆测序,而后与GenBank数据库信息比对,并利用MEGA 5.0软件构建系统发育树,从分子水平上鉴定其种属地位及系统进化关系。结果表明:承德红蘑与血红铆钉菇(Chroogomphus rutilus,Accession No.:KR082876)、白蘑与Hygrophorus queletii(Accession No.:JF908069)的相似性均达到99%。承德红蘑与血红铆钉菇C.rutilus(Accession No.:KR082876),承德白蘑与H.queletii(Accession No.:JF908069)的遗传关系最近,遗传距离为0.002。因此,承德红蘑和白蘑经分子鉴定为C.rutilus和H.queletii,其分类地位的解析,对今后野生红蘑和白蘑种质资源鉴定、生物学特性研究及开发利用奠定了基础。     

秦皇岛地区三种野生食用菌分子鉴定与系统发育分析

以秦皇岛地区的肉蘑、嘎蘑和松蘑3种野生食用菌子实体为试材,使用真菌通用引物ITS1和ITS4对基因组rDNA的ITS区进行PCR扩增、克隆测序.将测序结果与GenBank数据库信息比对,并构建系统发育树,从分子水平上研究其分类地位和系统发育关系,以期为3种野生食用菌的合理开发和人工驯化奠定基础.结果 表明:肉蘑与Chroogompus rutilus (MG457851.1)相似性最高(99％),嘎蘑与Lactarius akahatsu (EF685045.1)相似性最高(100％),松蘑与Suillus granulatus (MF421107.1)相似性最高(96％).系统发育分析表明,肉蘑与C.rutilus、嘎蘑与L.akahatsu遗传关系最近,遗传距离均为0,与松蘑遗传关系最近的物种为S.granulatus,但遗传距离较远,为0.033.综合分析,秦皇岛地区肉蘑分子鉴定为色钉菇(C.rutilus),嘎蘑为浅橙红乳菇(L.akahatsu),松蘑为牛肝菌属(Suillus)的一种真菌.     

大花杓兰根际与非根际土壤真菌多样性的高通量测序分析

采用Illumina Miseq高通量测序技术对大花杓兰根际与非根际土壤真菌群落组成进行对比分析。结果表明,大花杓兰根际土壤获得63 780条Clean tags,非根际土壤获得48 094条Clean tags。基于≥97%的相似度水平,通过聚类共获得1 223个OTUs,根际和非根际土壤真菌OTUs数量分别为1 004和945,二者共有726个OTUs。Chao1和Shannon指数揭示根际土壤真菌群落在丰富度和多样性上均高于其非根际土壤。与非根际土壤相比,在门、纲、目、科和属分类水平上丰度显著增加的根际土壤真菌类群分别为担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、伞菌目(Agaricales)和鸡油菌目(Cantharellales)、小菇科(Mycen-aceae)和角担菌科(Ceratobasidiaceae)、小菇属(Mycena)和角担菌属(Ceratobasidium)。首次从分子水平上揭示大花杓兰根际与非根际土壤真菌群落的多样性对大花杓兰的保育具有重要意义。     

大花杓兰内生真菌多样性研究

对大花杓兰(Cypripedium macranthum Sw.)内生真菌类群组成及多样性进行了分析。结果表明,从大花杓兰植株中分离到内生真菌59株,利用ITS-r DNA序列分子鉴定法将大花杓兰内生真菌鉴定为18个分类单元,分布在7纲9目11科16属。北京大花杓兰内生真菌包括12个属,内生真菌的多样性指数H=1.39、D=0.96,优势菌群为毛壳菌属(Chaetomium)和茎点霉属(Phoma)真菌,分别占总菌株数的15.25%和8.47%;吉林大花杓兰样品内生真菌归于9个属,内生真菌的多样性指数H=1.31、D=0.93,以毛壳菌属(Chaetomium)为优势菌群,占总菌株数的23.73%。由此可见,北京大花杓兰中内生真菌多样性高于吉林大花杓兰。     

规模养殖场动物防疫现状及管理对策

规模养殖场的持续健康发展,对于提升当地经济发展水平具有积极意义。开展动物防疫工作,是保证规模养殖场健康运行的重要前提。本文从宁县养殖基本情况分析入手,重点介绍了动物疫病防控现状和其中存在的问题,并提出了一些切实可行的建议,以供参考。     

铁皮石斛亲环蛋白基因DoCyP的克隆及表达分析

采用RT-PCR技术克隆了铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)亲环蛋白基因(DoCyP),其大小为522 bp,编码173个氨基酸。生物信息学预测,DoCyP相对分子质量18.25 kD,理论等电点8.72,含肽脯氨酰顺反异构酶保守结构域,无跨膜结构域,是稳定的亲水性蛋白质。SOPMA预测DoCyP的二级结构主要由无规卷曲和延伸链构成。系统进化树揭示铁皮石斛DoCyP与深圳拟兰CyP聚为一支,亲缘关系较近。qRT-PCR分析表明,DoCyP在铁皮石斛组织中为组成型表达,在根中表达量最高,叶和茎中表达量较低。4℃胁迫12h,DoCyP在铁皮石斛根和茎中表现为上调表达,在叶中下调表达。推测DoCyP参与铁皮石斛对低温胁迫的应答。     

大花杓兰根际土壤真菌及兰科菌根真菌多样性分析

【目的】从分子水平上对兰科杓兰属大花杓兰根际土壤真菌群落组成及潜在兰科菌根真菌进行初步研究。【方法】采用克隆文库技术对大花杓兰根际土壤真菌的ITS片段进行PCR扩增、克隆测序及BLAST分析。【结果】共获得96个真菌克隆,其中44个克隆鉴定为未知真菌,52个真菌克隆基于97%的序列相似性被划分为24个操作分类单元(Operational Taxonomic Unit, OTU),属于5门6纲11目16科15属。被孢霉属Mortierella为大花杓兰根际土壤的主要真菌类群。综合兰科植物菌根真菌的研究报道,对24个OUTs进一步分析,发现4个OTUs为潜在的兰科菌根真菌,分别属于角担菌科Ceratobasidiaceae的丝核菌属Rhizoctonia(OTU1)和角担菌属Ceratobasidium(OTU2)及胶膜菌科Tulasnellaceae(OTU3和OTU4)。【结论】根际土壤真菌及潜在兰科菌根真菌类群的构成及多样性研究,对从土壤中分离筛选有效的大花杓兰菌根真菌及其野生种群的迁地保育均具有重要意义。     

菊芋查尔酮合成酶基因的克隆与表达分析

为揭示菊芋(Helianthus tuberosus L.)查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因的功能,以菊芋‘廊芋8号’叶片为材料,采用同源克隆和RT-PCR技术,克隆得到菊芋CHS基因命名为HtCHS,其编码区全长为1 197 bp(GenBank登录号MN124515),编码398个氨基酸。HtCHS的基因组DNA(gDNA)全长为1 567 bp,含2个外显子和1个内含子。序列比对和系统进化树分析显示,不同植物中的CHS氨基酸序列具有极高的同源性,菊芋与同属的向日葵CHS氨基酸序列一致性达到99.25%,共聚于一个分支。HtCHS蛋白相对分子质量为43.61 ku,等电点为6.33。HtCHS蛋白具有查尔酮合成酶结构域,属于查尔酮合成酶超家族成员,HtCHS不含信号肽和跨膜区,属于非分泌蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,HtCHS在根中表达量最高。与对照相比,150 mmol·L~(-1) NaCl和20%PEG 6000处理6 h时HtCHS表达显著上调,处理12 h时显著下调。原核诱导表达分析结果显示,成功诱导出与预测蛋白大小一致的目的蛋白。     

国家自然科学基金资助菌根研究项目情况分析

菌根(Mycorrhiza)是土壤中的真菌与植物根系形成的一种共生体。国家自然科学基金资助项目能基本反映某一学科基础研究的动态及趋势。现从项目概况及所涉及的二级学科、依托单位、项目主持人和菌根项目研究内容等方面对1997—2014年国家自然科学基金资助的菌根项目情况进行分析。结果表明:国家自然科学基金资助的菌根项目数量及所涉及的经费总体呈上升趋势,特别是2009—2012年上升幅度最大;立项项目以生命科学部为主,尤以生态学和林学学科为主要领域,研究热点为AM菌根和外生菌根;项目依托单位以高等院校为主体,其中中国农业大学承担项目14项,项目数最多;所有项目主持人中,约1/5的负责人获得了2次及2次以上项目资助。研究结果对分析国内菌根的基础研究水平具有重大的意义,同时对菌根科研人员今后项目申报有一定的参考价值。