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参考 Genbank收录的 TGEV- Miller株的基因序列 ,自行设计合成 1对引物 (TGEVP5 /P6 ) ,对不同代次的 TGEV疫苗弱毒 STC3及种毒 、种毒 进行了 RT- PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,均出现 1条大约 12 6 2 bp的目的条带 ,经 Eco R 酶切 ,都产生了 871bp和391bp左右的两个片段 ,与预期大小相符。将种毒 RT- PCR扩增目的条带回收纯化后克隆入PMD18- T载体中 ,转化宿主菌 DH5 α,挑选阳性克隆 (命名为 PTs) ,提取重组质粒 ,用 Hpa 、Eco R 对重组质粒进行酶切鉴定以及 PCR扩增 ,然后进行序列测定 ,并进行了序列分析 ,证实与国外标准毒株 Miller、Fs772 / 70、Purdue、TO14等有较高的同源性 相似文献
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抗霉菌素“120”是一种新的农用抗菌素,防治农作物上多种病害都有效。实验室试验证明;本剂与杀灭菌酯混用,对防治病害和虫害的效果没有不良影响,因此可以减少打药次数,有一定经济意义。 相似文献
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AIM: To investigate the effect of cGMP on voltage-gated potassium channel in pulmonary artery smooth muscle cells (PASMCs) from rats exposed to chronic hypoxia. METHODS: (1) Wistar rats were randomly divided into control group (group A) and chronic hypoxia group (group B). Then group B received hypoxia 8 hours per day for 4 consecutive weeks. (2) Single PASMC was obtained via acute enzyme separation method. (3) Conventional whole-cell patch clamp technique was used to record resting membrane potential (Em) and ion currents of voltage-gated potassium channel. The changes of ion currents of voltage-gated potassium channel before and after applying cGMP (1 mmol/L), an agonist of protein kinase G (PKG), and cGMP plus H-8 (1 mmol/L), an inhibitor of PKG were compared between two groups. RESULTS: The Em of group B were significantly lower than that of group A. The ion currents of voltage-gated potassium channel in group A and group B were all significantly inhibited by cGMP [control group: from (118.0±5.0) pA/pF to (89.9±16.5) pA/pF, n=6, P<0.05;chronic hypoxia group: from (81.0±5.0) pA/pF to (56.8±9.1) pA/pF, n=6, P<0.05]and these effects were reversed by H-8 [control group: from (119.2±10.3) pA/pF to (117.8±9.1) pA/pF, n=6, P>0.05;chronic hypoxia group: from (96.8±6.2) pA/pF to (98.0±2.2) pA/pF, n=6, P>0.05]. CONCLUSIONS: The currents of voltage-gated potassium channel was inhibited by chronic hypoxic. The inhibitory effect of cGMP on currents of voltage-gated potassium channel in PASMCs from both normal and chronic hypoxic rats may be probably through the phosphorylation of voltage-gated potassium channel. 相似文献
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表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病病毒的构建 总被引:4,自引:1,他引:4
将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒和CMV启动子控制下的H3N2亚型猪流感病毒(SIV H3N2)的HA基因插入到伪狂犬病病毒(PRV)通用转移载体pBdTK-Uni中,获得转移载体pLTK-HA。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细胞,经过10代蓝斑筛选、纯化和PCR鉴定获得了一株插入SIV HA基因的重组伪狂犬病病毒,命名为rPRV-HA。Western blotting和间接免疫荧光试验证实HA基因在重组病毒感染的细胞中获得了表达。用不同的细胞(PK-15、IBRS-2、Vero和鸡胚成纤维细胞)对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和致细胞病变进行比较,未见显著差异,对第30代重组病毒的HA基因进行序列分析,表明该重组病毒遗传性状稳定。 相似文献
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9.
山东省胶莱盆地的高岗部位存在大量的风尘堆积物,对其年代的研究一直存在较大的分歧.对胶莱盆地的潍坊前埠下风尘堆积剖面进行了系统的光释光年代测试,并与其以北16.9km的昌邑县徐林庄剖面的年代进行了对比,初步建立了胶莱盆地风尘堆积的光释光年代序列,研究表明该区风尘堆积主要是晚第四纪以来形成的堆积物. 相似文献
10.
RAN Xu-hua CAO Si ZHANG Yao WEI Xiao-man WEN Xiao-bo NI Hong-bo ZHU Zhan-bo 《中国畜牧兽医》2015,42(5):1104-1109
Rotavirus is a major cause of acute diarrhea in both many kinds of young animals and children under 5 years old.Rotavirus NSP1, a 55 ku RNA binding protein, is the product of gene 5, which can subvert innate immune responses and be one of virulent determinant factors.According to the sequence in GenBank, specific primers targeting to NSP1 gene were designed and the gene was amplified by RT-PCR, following by being cloned into the pET-28a(+) vector.It showed that the full length of NSP1 gene was 1 473 bp, encoding 491 amino acids.The NSP1 shared the highest identity with WC3 strain.The recombinant protein was induced in E.coli Rosetta(DE3) by IPTG and was analyzed by SDS-PAGE and Western blotting.The results revealed that NSP1 recombinant protein existed in the form of inclusion body with the molecular weight of 55 ku.The purified recombinant protein could be recognized by His-tag antibody.This study laid the foundation for further research on the relationship between the intracytoplasmic location of NSP1 protein and its activity. 相似文献