应用计算机和气象资料对草场上马歇尔线虫数量季节消长预测技术的研究

根据土源性寄生线虫体外发育期间受温度、湿度、季节和宿主动物影响的原理,采用电子计算机对上述因子和马歇尔线虫从虫卵发育到侵袭性幼虫的速度、数量进行分析回归,制定出模拟模型,设计出草场上该种线虫从虫卵发育到侵袭性幼虫数量的预测预报公式。将气象资料代入公式计算出侵袭性幼虫季节消长曲线,并与草场上羊体内成虫数量消长曲线相互对比。研究初步显示,可以采用气象资料通过计算机计算处理预测草场上马歇尔线虫侵袭性幼虫数量的季节动态,从而为制订防治措施提供科学依据。     

基于Nc2和Nc5基因的新孢子虫PCR方法的建立

本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231 bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499 F/SN/T 3499 R的最低检测量相同,为19.9 fg/μL,F2/R2最低检测量为199 fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9 pg/μL和199 fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。     

Establishing the Screening PCR Diagnostic Method of Neosporacaninum Based on Nc2 and Nc5 Genes

To screen applicable PCR diagnostic primers of Neosporacaninum based on Nc2 and Nc5 genes,two pairs of primer were designed according to the Nc2 and Nc5 genes sequences conserved region and"Quarantine Protocol For Neosporosis"(SN/T 3499-2013)were applied to verify the characteristic of primers.14 Holstein and 19 Simmental cattles blood DNA were detected using these primers by PCR to select specific primers which would be used to establish the new detection method and understand the neosporiasis infection rate of different local cattle farms.The results showed that 105,128 and 231 bp gene fragments were amplified using three pairs of primers,which were consistent with the expected fragment size.The F1/R1 and SN/T 3499 F/SN/T 3499 R minimum detectable amount both were 19.9 fg/ μL and the minimum amount of F2/R2 was 199 fg/ μL,indicating that F1/R1 and SN/T 3499 F/SN/T 3499 R were more sensitive than F2/R2.The bands were bright when used F1/R1,F2/R2 primers to amplify 19.9 pg/μL and 199 fg/μL DNA samples,proving two primers had good repeatability.6 positive samples were detected among 33 blood samples,and the positive rate was 21.43% and 15.79%,the recombination rate was 100%.It showed that F1/R1 and F2/R2 primer were both suitable to detect eneosporosis by PCR and the method was preliminary established.The condition of local cattle Neosporacaninum infections were learned.This study could provide a scientific basis for the effective prevention and control of neosporosis.     

在绵羊体内及草场上马歇尔线虫各发育阶段的季节动态研究

本试验对典型的亚高山高寒草甸草原--巴音布鲁克草原绵羊寄生线虫的优势种马歇尔线虫进行了成虫寄生量、羊粪便中虫卵排出量和寄生虫体外发育育成率的逐月观察,结合气温、相对湿度、蒸发量和雨量的观察记录,得出了马歇尔线虫各发育阶段在绵羊体内及草场上的季节动态及与气温、湿度变化的关系。马歇尔线虫在体内的寄生量和草场上的体外育成量得出的成虫数量低谷在2006年7月～2006年8月,高峰在2006年11月第1次出现,到2007年2月出现1次明显的下降,而到2007年4月再次明显的升高。寄生性幼虫数量低谷于2006年7月～2006年8月,高峰在2006年9月第1次出现,到2007年2月再次升高。马歇尔线虫寄生性幼虫高峰与成虫高峰相对应。结果表明成虫高峰随体外幼虫高峰而来,粪便中虫卵的峰值则往往跟随成虫高峰而出现。体外育成率的高低又明显受气温及湿度影响,平均湿度低于50%时无峰出现,低于5.6 ℃时育成率为零,湿度在79%以下时育成率很低。本试验对羊体内及草场上寄生性马歇尔线虫季节消长规律进行了研究,为制定合理防制措施提供理论依据。