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多重PCR/RT—PCR技术检测PRRSV、PPV、PRV和PCV-2 总被引:1,自引:1,他引:1
根椐GenBank中已发表的猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等4种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PRRSV M和N、PPV VP2、PRV gD、PCV-2ORF2基因的保守区为各病毒的诊断靶序列.在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了4种病毒的四重PCR技术,可同时扩增PRRSV的660 bp(北美株),PPV的313 bp,PRV的217 bp,PCV-2的447 bp的特异性片段.用82份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR/RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为93%以上.表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这4种病毒的同时检测和鉴别诊断. 相似文献
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为了解Nsp2Δ1882-2241缺失后弱化的高致病性PRRSV(TJM株)对宿主免疫学应答的刺激机理,本研究分析了免疫猪血清中的细胞因子及变化规律。将14头4周龄易感仔猪随机分为3组:第1组接种PRRSV TJM-F92株,为免疫组;第2组接种高致病性PRRSV TJ-F5毒株,为攻毒组;第3组不接种疫苗及病毒,为对照组。接种后28d,用TJ-F5毒株攻击试验猪,于不同时间点采集血样,用ELISA法测定血清中的PRRSV抗体、IL-2、IL-10、IL-12p40、TNF-α、IFN-α和IFN-β水平。结果显示:(1)与对照组和攻毒组相比,免疫组猪IL-12p40水平持续上调,于免疫后28d受PRRSV强毒攻击后,其水平开始缓慢降低,但仍高于攻毒后的对照组。(2)免疫组IL-2水平在接种疫苗后的前21d内无明显升高且低于攻毒组,在受到强毒攻击后其IL-2水平却有明显升高。(3)免疫组IL-10水平与对照组无明显差别,并在免疫14d后一直显著低于攻毒组(P〈0.01)。(4)免疫组接种疫苗后的前21d内,TNF-α水平保持稳定,28d明显上调。攻毒组TNF-α水平0~28d一直低于对照组,且在21d达到最低(P〈0.01)。免疫组在28d受强毒攻击后,其TNF-α水平下降且在攻毒7d时最为明显(P〈0.01),此后恢复到正常水平。(5)免疫组免疫后28d时IFN-α水平升高,在受到强毒攻击后再次显著降低(P〈0.01)。免疫组IFN-β水平一直低于对照组和攻毒组,不因强毒攻击而变化。以上结果提示,IL-12上调在PRRSV免疫保护中起明显作用;另外,上调TNF-α及下调IL-10都是基因缺失疫苗发挥效力的潜在机制。 相似文献
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选择17头28日龄的CSFV和PRRSV抗体均为阴性的仔猪,于试验的第1天和第14天分别对其进行猪瘟耐热保护剂活疫苗(兔源)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征Nsp2A1882—2241弱毒疫苗免疫。在免疫后的第28、42天采集外周血液,分析特异性抗体表达量和外周血T淋巴细胞表型的变化,评估猪瘟免疫对猪繁殖与呼吸综合征免疫的影响。结果显示,在CSF免疫后第28、42天,CSFV高抗组中的CD4^+、CD4^+/CD8^+、CD4^+CD8^+和CD4-CD8数目均比CSFV低抗组高,CD3^+和CD8^+细胞数量比CSFV低抗组低;PRRS高抗组中,CD4CD8-细胞含量高于PRRS低抗组;在CSF免疫后第28天,CSFV抗体产生较高(阳性比率为73.33%),PRRSV抗体产生较低(阳性比率仅为6.67%)。在CSF免疫后的第42天,CSF高抗组中PRRSV抗体阳性比率较CSF低抗组高8.33%。结果表明,CSFV特异性抗体产生高时能增加PRRSV特异性细胞免疫应答,增加CD4^+细胞、CD4^+CD8^+细胞数量,提高机体免疫水平。CD3+和CD4CD8-细胞应答作用值得重视。 相似文献
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鸡β-防御素在大肠杆菌中的高效表达及复性 总被引:2,自引:0,他引:2
鸡β-防御素(gallinacin-3,Gal3)是鸡体内重要的防御因子,本试验研究了鸡Gal3融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的规律,并探索了重组蛋白质的复性工艺.结果表明,加入诱导剂后1h,开始有可检出量的重组蛋白质表达,2h的表达水平已接近最大量;化学诱导剂IPTG 0.2~1.2mol/L对重组蛋白的产量没有明显影响.经Lablmage软件分析,融合蛋白的产量可达菌体总蛋白的35%以上,且主要以包涵体形式存在.将所获包涵体用8mol/L尿素溶解后,分步稀释于含有氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽的复性系统中,重组蛋白得到完全复性.12mg/L复性的重组鸡Gal3能抑制肠炎沙门氏菌的生长,24mg/L能抑制肠致病型大肠杆菌的生长. 相似文献
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应用PRRSV-GP5特异性肽刺激CSF、PRRS免疫猪外周血淋巴细胞,采用EI。IsA方法测定不同时间点淋巴细胞分泌IFN-7及IL-10的水平,分析PRRSv_GP5特异性肽刺激后,淋巴细胞培养上清中细胞因子的变化规律。结果显示,CSFV高抗PRRSV低抗体组于PRRSV免疫14d,肽刺激组中IFN-7水平显著高于对照组(P〈0.05);其他组均差异不显著(P〉0.05)。PRRSV免疫14d,细胞培养24,72h后加PRRSV—GP5肽刺激,各组中试验组与对照组相比IL-10水平明显降低(P〈0.01);PRRSV免疫28d,各组中肽刺激组与空白组相比,IL-10水平均无显著性差异(P〉0.05)。结果表明,PRRSV-GP5肽在PRRSV免疫早期可以促进IFN-7的分泌,并抑制IL-10的产生,但在免疫后期对淋巴细胞分泌的调节作用还需进-步研究。 相似文献
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通过对1991-2017年乐亭县气象观测资料温度、降水的统计分析,研究气象条件与海参养殖的关系,特别是高温、暴雨等灾害性天气对海参养殖的影响。目的在于为渔民安全健康养殖海参提供科学气象依据,促进海参养殖的可持续发展。结果表明:乐亭县4-5月、9-10月温度、降水条件均适宜池塘海参生长。3月、6月有部分日期温度是适合的,7-8月气温较高不适宜海参生长,处于夏眠期;1-2月、12月气温较低不适合海参生长,处于冬眠期。乐亭7-8月降水量较大,一年中春季和秋季是海参生长的两个旺季;夏季和冬季是池塘海参养殖的夏眠期和冬眠期。 相似文献
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水利工程施工过程中,常常要用到钢筋混凝土,混凝土主要是由砂石骨料、水泥、水及其他外加材料混合而成的一种合成材料,具有强度高、可塑性强、施工方便等特点,但由于种种原因,混凝土工程常会出现裂缝,裂缝是一种常见的工程病害,轻则会降低混凝土的强度及承载力,重则会使工程质量受到严重影响,威胁到人民群众的生命、财产安全,所以在水利工程中,一定要重视,本文分析了裂缝产生的原因,并提出了修补方案。 相似文献
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郁茏富得快是由复合微生物菌、内源起动酶、内源生长酶、膨大酶、活性酶组成的复合微生物酶制剂,富含腐殖酸、氨基酸、钙、镁、铁、铜、锌、锰、硼等多种中微量元素。为验证施用此肥料对棉花生育性状及产量的影响,特在133团设置该肥料在棉花上的肥效对比试验,以供棉农参考。 相似文献