猪流行性腹泻病毒S蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

猪流行性腹泻病（porcine epidemic diarrhea,PED）是一种高度接触性肠道传染性疫病,主要危害1周龄以内的仔猪,仔猪感染死亡率高达100%,是目前危害世界养猪业的主要疫病之一。本研究旨在制备针对猪流行性腹泻病毒S蛋白的特异性纳米抗体并鉴定其结合活性。作者原核表达并纯化PEDV S1蛋白,将纯化后的PEDV S1重组蛋白免疫双峰驼,第4次免疫后分离其外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞RNA,反转录得到cDNA,通过巢式PCR扩增VHH片段,并构建至pCANTAB-5E载体中,电转化至TG1感受态细胞,得到VHH噬菌体抗体展示文库;随后,对构建的噬菌体抗体展示文库进行救援和3轮富集,利用噬菌体展示技术从中筛选针对PEDV S蛋白纳米抗体,通过ELISA验证筛选的纳米抗体的特异性和结合力。通过Western blot和间接免疫荧光验证纳米抗体与PEDV的结合活性。结果显示：成功表达并纯化PEDV S1蛋白,经4次免疫后,双峰驼血清中的特异性抗体效价达到了1∶256 000。构建的噬菌体展示文库的库容量为2.1×10⁷,阳性率85%;对噬菌体展示文库3轮的淘选富集后,最终筛选出6株氨基酸序列不同的纳米抗体,ELISA结果显示,6株纳米抗体均对PEDV S1重组蛋白具有良好的结合力与特异性。随后验证了Nb3能够与PEDV结合,表明其具有良好的活性。成功筛选到针对PEDV S1蛋白的特异性纳米抗体,所筛选纳米抗体有望用于PED的诊断和治疗,同时为PEDV的致病机制研究提供抗体材料。     

病毒调节宿主适应性免疫的分子机制

在适应性免疫过程中,机体主要通过T细胞和B细胞特异性识别入侵的病毒并将其清除.正常情况下,产生的抗体有利于病毒清除,但有些病毒存在抗体依赖增强作用(ADE),亚中和浓度或非中和抗体反而促进病毒感染.自然杀伤(NK)细胞的记忆性和特异性,使其与适应性免疫的界限越来越模糊.病毒为了更好地在宿主细胞中生存,进化出多种可逃逸宿...     

酸性硫酸钙对临床常见致病微生物的杀灭能力

[目的]研究消毒剂酸性硫酸钙(ACS)对微生物的杀灭效果,为用消毒剂防控人畜疫病提供基础数据和理论依据.[方法]将ACS与中和剂(3％卵磷脂、5％吐温-80的磷酸盐缓冲液)共孵育一段时间后,再分别加入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)共培养一段时间,将与细菌的混合物涂布于营养琼脂平...