猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立

为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平,用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为0.5μg/m L,包被时间4℃过夜,5%脱脂乳的PBS封闭37℃2 h及4℃过夜。血清稀释度为1∶100;37℃作用45 min,辣根过氧化物酶标记兔抗猪Ig G稀释度为1∶10 000,37℃温育60 min,底物显色37℃15 min。抗体临界值为OD450nm≥0.30判为阳性,OD450nm≤0.27判为阴性,介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验,结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本184份,总阳性率为68.5%。     

牛日本血吸虫病抗体检测试纸条的研制及初步评价

为了建立一种检测牛日本血吸虫病的快速诊断技术,试验以乳胶微球标记的兔抗牛IgG抗体作为免疫探针,以血吸虫可溶性抗原为检测线,羊抗兔IgG为质控线,研制了牛日本血吸虫病抗体检测试纸条。对该试纸条进行了效价、敏感性、特异性、非特异性、保存期、批内批间可重复性及符合率等各项试验,结果表明试纸条的效价为1∶2;对于实验感染日本血吸虫28 d和 35～56 d的病牛血清,试纸条的敏感性分别为20%（2/10—检出阳性份数/检测数）和100%（30/30）;用于检测健康牛血清的特异性为100%（20/20—检出阴性份数/检测数）,检测东毕吸虫、肝片吸虫、锥虫病牛血清,未见交叉反应现象;对于粪孵确诊为血吸虫病阴、阳性的牛血清,试纸条与粪孵法的阴阳性符合率均为100%;与IHA阴阳性符合率也均为100%;试纸条批内批间可重复性好,2～8℃保存的试纸条有效期达15个月。用试纸条检测实验感染血吸虫牛治疗前后体内不同时期血清抗体的水平,发现牛感染血吸虫后第5周的血清均可检测出血吸虫抗体,在治疗后第16～24周血吸虫抗体消失。     

企业偷排抗生素政府真不知情吗

<正>近日,央视针对地表水抗生素超标的一次暗访报道,让公众惊呆了。记者发现,全国主要河流黄浦江、长江入海口、珠江都检出抗生素……更令人咋舌的是,作为中国四大抗生素生产基地之一的山东鲁抗医药大量偷排抗生素污水,浓度超自然水体10 000倍。抗生素放在药店里卖价格挺贵的,可这种排放到大自然中的免费药,公众却有些消受不起。     

几种新型安全添加剂对断奶兔的影响

选取96只35日龄新西兰肉兔随机分为4组,每组设3个重复,每个重复8只,在相同的营养水平条件下比较益美多、抗菌肽、溶菌酶对肉兔生长性能的影响,试验期为30 d。结果显示,溶菌酶组的日增重为32.47 g,高于对照组9.81%(P<0.05),其他组间差异不显著;添加益美多、抗菌肽、溶菌酶均能改善肉兔血液生化指标,肠道pH值降低(降低8.60%～9.77%),减少盲肠内大肠杆菌数量(减少10.65%～11.22%),增加盲肠内乳酸杆菌数量(增加11.97%～13.68%);添加溶菌酶、抗菌肽可显著降低肉兔的腹泻率;溶菌酶组的死亡率为0。试验提示,溶菌酶可以作为肉兔新型安全有效的添加剂。     

日本血吸虫22.6kD重组抗原二步金标免疫渗滤法诊断家畜血吸虫病的初步研究

以胶体金标记的日本血吸虫重组抗原GST-Sj22.6为探针,检测家畜血吸虫抗体,建立重组抗原金标免疫渗滤法（RAg-T-DIGFA）。该法可以检测出人工感染血吸虫尾蚴28 d和21 d以上的阳性牛和兔血纸抗体,用该法检测肝片吸虫、蛔虫、弓形虫、旋毛虫病血清抗体,无交叉反应。与T-DIGFA法阳性符合率为100%,阴性符合率为100%。血吸虫抗原胶体金在4～8℃保存期可达6个月、室温保存期为3个月。重组蛋白金标免疫渗滤法具有抗原容易制备和良好的敏感性、特异性、重复性和稳定性,适合于基层单位和现场进行家畜血吸虫病抗体的快速诊断。     

免疫层析试纸条监测实验感染日本血吸虫病牛治疗前后抗体消长

应用牛日本血吸虫病抗体检测免疫层析试纸条（以下简称试纸条）检测5头牛实验感染日本血吸虫（以下简称血吸虫）后0～10周和治疗后第1～24周的血清抗体。结果表明,牛在感染后第4～5周开始检测到血吸虫抗体,在感染后第8～10周抗体水平达高峰,从治疗后第6周开始,抗体水平逐渐下降,1,2,3,4和5号牛依次在治疗后第24,16,22,20和20周抗体转阴。     

日本血吸虫Sj22.6-LHD-Sj23融合基因的克隆及原核表达

为获得具有良好抗原性的日本血吸虫重组蛋白,本研究设计了两对特异性引物,以日本血吸虫mRNA为模板,RT-PCR方法分别克隆基因片段Sj22.6ku和LHD-Sj23,以重叠延伸PCR方法将两个片段连接,构建原核重组表达质粒pET28-Sj22.6-LHD-Sj23;该重组质粒在大肠杆菌Rosetta DE3中表达后所获得的融合蛋白Sj22.6-LHD-Sj23分子量约为35 ku。Western blot鉴定结果表明该重组蛋白有良好的免疫原性,为进一步研制日本血吸虫病分子诊断试剂盒奠定了基础。