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采用PCR方法从绿脓杆菌ATCC27853菌株基因组扩增其外毒素A(PEA)全长编码基因,并将PEA基因插入到pcDNA3.1A真核表达载体中,构建成pcDNA3.1/ PEA质粒表达载体。经磷酸钙介导将重组质粒转染 HEK293T 细胞进行表达。结果表明本文克隆的PEA基因与标准菌株PA103碱基序列基本相似,同源性达99%。表达产物经蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测,表明本文构建的含有原基因信号肽的PEA基因能够在真核细胞进行分泌性表达,这为基于PEA的免疫毒素、疫苗佐剂和疫苗载体的研究奠定了基础。 相似文献
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为了便于商品肉鸡饲养方式的科学筛选,试验采用地面平养方式(对照组)和阶梯笼养方式(试验组)饲养肉鸡,对照组按照饲养平面区域平均分为9个采样区域作为9个重复,试验参照对照组在上中下层分别设9个重复(S1~9、Z1~9、X1~9),利用自动环境测定仪对每个重复的主要环境参数温度、湿度、风速及PM2.5、PM10、CO2、NH3浓度进行测定,每个重复采集数据5 min,每隔5 s采集数据1次,统计分析组内和组间环境参数差异,并计算差异倍数。结果表明:在温度、湿度和风速方面,对照组各参数平均值分别为27.46℃、55.38%、0.06 m/s,差异倍数分别为0.09,0.15,2.00;试验组上层各参数平均值分别为26.99℃、50.45%、0.04 m/s,差异倍数分别为0.03,0.38,4.50;试验组中层各参数平均值分别为26.71℃、48.47%、0.07 m/s,差异倍数分别为0.08,0.54,1.71;试验组下层各参数平均值分别为25.96℃、48.45%、0.07 m/s,差异倍数分别为0.13,0.46,2.57。在PM2.5、P... 相似文献
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为了建立一套犬IFN-γ(cIFN-γ)在HEK293T细胞中表达的方法,用伴刀豆球蛋白A(ConA)刺激犬脾细胞,通过RT-PCR方法从脾细胞中扩增犬IFN-γ基因,并将其克隆到pcDNA3.1A载体中,构建的真核表达载体pcDNA3.1A-cIFN-γ经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:克隆的犬IFN-γcDNA基因与GenBank上发表的序列一致,同源性100%。表达产物经Western-blot方法检测,证明克隆的犬IFN-γ基因能够在HEK293T细胞中进行表达,并且表达产物能够分泌到细胞外。 相似文献
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猪β防御素-2基因在HEK293T细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
用Trizol试剂提取猪血白细胞总RNA,根据已发表的序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增出猪β防御素-2(pBD-2)基因,并将该基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成猪β防御素-2基因的真核表达载体pcDNA3.1A/pBD-2,经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:本试验扩增的pBD-2基因与已发表的序列完全一致。表达产物经Western-blot检测,证明pBD-2能够在真核细胞HEK293T中表达。 相似文献