HPLC法同时测定和评价“黔中金荞麦”中4种成分含量

“黔中金荞麦”是贵州省农业科学院畜牧兽医研究所选育的优质牧草(品种登记号：2019581),为建立同时测定该药材中表儿茶素、原花青素B₂、芦丁和槲皮素的检测方法,考察其含量多样性,采用高效液相色谱法测定并分析其含量与野生金荞麦的差异。C₁₈柱(250×4.6 mm, 5μm),乙腈-0.4%磷酸水梯度洗脱,进样量10μL,流速0.7 mL/min,检测波长254 nm,温度30℃;原花青素B₂、表儿茶素、芦丁和槲皮素分别在5～85(r²=0.9998)、5～80(r²=0.9998)、0.5～8(r²=0.9996)、0.125～2.0μg/mL(r²=0.9999)范围内呈现良好线性关系,加样回收率高;黔西和麦坪的“黔中金荞麦”4种成分总含量高达1189.70、1108.01μg/g,其中原花青素B₂、芦丁和槲皮素含量最高,丹寨野生金荞麦表儿茶素含量最高。结果表明,本法准确可靠,适合“黔中金荞麦”的内控质量监测...     

杠板归对猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR表达量的影响

为探索杠板归对猪源耐氟苯尼考大肠杆菌耐药基因floR表达量的变化,采用二倍稀释法测定杠板归59.92%乙醇提取物对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),同时测定提取物处理后氟苯尼考的MIC,利用荧光定量PCR法建立标准曲线检测耐药基因floR的表达量。结果发现,杠板归提取物对5株大肠杆菌的MIC介于2.48～9.64 g/L之间,氟苯尼考对亚抑菌浓度药物处理后的大肠杆菌MIC值可下降至76.76%,floR基因荧光定量PCR反应的线性回归方程为C_T=-3.02×lg拷贝数+28.77,r²=0.9 992,杠板归提取物对5株耐药菌floR基因表达量分别下降13.02%、10.00%、15.21%、10.25%和8.84%。试验结果表明提取物具有较好的耐药消除作用,对floR基因表达量有明显抑制作用,提示在中药提取物中寻找耐药性大肠杆菌floR基因抑制剂有一定前景。     

牛源化脓隐秘杆菌的分离鉴定与黔中金荞麦体外抑菌试验

为分离致病性牛源化脓隐秘杆菌并探究黔中金荞麦对该菌的体外抑制作用,本试验对采集于贵州省凯里市某养殖场疑似患牛呼吸道综合征的病死牛肺组织进行细菌分离、形态学观察、生理生化鉴定、分子生物学鉴定、药敏试验和致病性试验,并运用打孔法探究黔中金荞麦提取物对分离菌株的体外抑制效果。结果显示,分离菌株为革兰阳性短棒状杆菌,结合生理生化和PCR鉴定结果,确定该菌为化脓隐秘杆菌,系统进化树分析也显示,分离菌株与化脓隐秘杆菌的模式菌株处于同一分支;该分离菌株可致10只小鼠于24 h内全部死亡;其对头孢他啶、利福平、青霉素等7种抗菌药敏感,对环丙沙星中介,对克林霉素、左氧氟沙星、庆大霉素等8种抗菌药耐药;黔中金荞麦不同组织部位、不同处理方法的提取物对该分离菌株均具有一定抑制效果,其中地下部分70%乙醇超声30 min提取物的抑菌效果最好,抑菌圈直径为(28.13±0.25) mm,与头孢喹肟的抑菌效果相当。本试验首次从贵州地区分离到致病性牛源化脓隐秘杆菌,黔中金荞麦对该菌具有良好的体外抑制效果。本试验结果可为该肉牛养殖场疫病防控以及牛化脓隐秘杆菌感染的治疗和预防提供参考依据。     

贵州金荞麦块根中表儿茶素含量的测定及分析

为了解贵阳地区不同生长年限的黔中金荞麦和贵州不同产地的野生金荞麦块根中表儿茶素含量,利用高效液相色谱法进行检测分析.结果:2年生黔中金荞麦的表儿茶素含量为349.48μg/g,达到《中华人民共和国药典》要求;贵州不同产地的野生金荞麦表儿茶素含量差异较大,丹寨县的野生金荞麦表儿茶素含量最高,达到590.89μg/g,可作...     

牛源化脓隐秘杆菌溶血素的重组表达及其间接ELISA检测方法的建立

为了建立检测牛源化脓隐秘杆菌抗体的间接ELISA检测方法,试验对分离的牛源化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin, PLO)基因序列进行分析,截去信号肽与跨膜区域后进行碱基优化,合成PLO基因片段,连接至原核表达载体pET-30a中,转化至Arctic Express(DE3)大肠杆菌感受态后诱导表达并纯化,以纯化后的重组蛋白作为抗原包被96孔板,建立牛源化脓隐秘杆菌PLO抗体间接ELISA检测方法,确定检测方法的临界值、特异性、敏感性、重复性,并用建立的方法对临床血清样本进行检测。结果表明：成功构建了重组原核表达质粒pET30a-PLO,实现了重组蛋白在Arctic Express(DE3)大肠杆菌感受态中的表达,并建立了用于检测牛源化脓隐秘杆菌PLO抗体的间接ELISA检测方法。该检测方法的临界值为0.354,与常见牛细菌阳性血清无交叉反应,阳性血清稀释至320倍检测仍高于临界值;批内、批间检测变异系数均小于5%;对10份已知阳性血清进行检测,阳性检出率为100%,80份临床牛血清的阳性检出率为21.25%(17/80)。说明该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,可用于牛源化脓隐秘...     

黔中金荞麦活性物质提取工艺优化及提取物抑菌活性研究

为优化贵州地区优质牧草黔中金荞麦活性物质的提取工艺，并探究提取物抑菌活性，试验通过回流法、超声法、水煮法及鲜样榨汁法对黔中金荞麦地上部分和地下部分进行提取，通过打孔法检测各提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌效果，确定提取方法；利用高效液相色谱法(HPLC)检测提取物中的有效物质含量，对溶液浓度、料液比、提取温度进行优化，设置正交试验确定最优提取工艺。以微量肉汤二倍稀释法检测在最佳提取条件下提取的黔中金荞麦提取物对3种细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明：黔中金荞麦地下部分的70%乙醇超声提取物对3种细菌均有抑制作用，对金黄色葡萄球菌抑菌效果最好，抑菌圈直径为24.2 mm。最佳提取工艺为乙醇浓度50%,提取温度60℃,料液比1∶40。提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的MIC介于31.25～62.5 mg/mL之间，MBC介于为62.5～500 mg/mL之间；对金黄色葡萄球菌的抑制效果较好，MIC和MBC分别为31.25 mg/mL和62.5 mg/mL。说明黔中金荞麦地下部分醇提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌均具有抑制作用...