伪狂犬病病毒变异株的鉴定及伪狂犬病的防控

2011年以来伪狂犬病病毒（PRV）变异株在中国大范围流行致伪狂犬病（PR）再次暴发。广东某猪场发生疑似PR引起母猪较大范围的流产,为此本试验展开对该病诊断和防控方法的研究。随机抽取流产和未流产母猪血清,应用ELISA检测PRV gE和gB抗体;同时采集发病仔猪脑组织PCR检测PRV gH片段。对全场母猪紧急接种PRV变异株灭活苗,分别应用ELISA和中和试验检测免疫前后的血清抗体。结果显示,已发生流产母猪血清PR gE抗体均为阳性,而未流产母猪血清抗体见弱阳性;流产母猪PRV gB抗体的S/P值高达4.0,未流产母猪也达3.3。PCR检测3头病仔的脑组织均为阳性,测序表明其gB基因与2012年流行毒株BJ-YT-2012序列相似性为100%。ELISA检测免疫灭活疫苗前母猪血清PRV gB抗体S/P值为1.603,免疫4周后升高到2.88;特别是中和抗体从1：24升高到1：213。这与免疫疫苗1周后母猪流产开始减少,2周后母猪少见流产的结果吻合。研究结果提示,PRV经典株疫苗产生的PRV gB抗体对变异株的保护作用不佳,而变异株疫苗的保护效果显著。     

利用废酸奶生产饲料活菌制剂

采用离心-冷冻干燥组合工艺,比较了不同工艺条件下废酸奶的脱水效果和菌种存活率,及载体种类和添加比例对成品状态和含水率的影响。结果表明：废酸奶经4 000 r/min 离心30 min 预浓缩后,添加质量比为10%的麦芽糊精作为载体,冷冻干燥7 h,可以得到含水率低于4.5%,活菌数7*107~6*108 CFU/g 冻干品的饲料活菌制剂,在0℃的贮存条件下袁普通包装可保存268 d袁真空包装可保存1年左右。由以上工艺可制得具有一定市场前景的功能饲料添加剂,其可提高牲畜免疫力,减少抗生素的使用,同时达到节能、减排的目的。     

东莞某屠宰场猪链球菌检测及分离鉴定

【目的】猪链球菌（Streptococcus suis,SS）是一种重要的猪病原菌,也是一种人兽共患病病 原体。其中猪链球菌 2 型（SS2）致病力最强,不但引起猪的急性败血症、脑膜炎、关节炎甚至死亡,也可 导致人的感染和死亡。为评估屠宰场猪链球菌的传播风险,对东莞某屠宰场进行猪链球菌的采样检测和分离 鉴定。【方法】采集 40 头猪的关节液和扁桃体进行 PCR 检测和猪链球菌分离,分离菌分别进行形态学和生 理生化鉴定、16S rDNA PCR 扩增、分型 PCR 检测和抗生素敏感性试验。【结果】 对 40 头猪的关节液和扁桃 体提取 DNA 进行 PCR 检测,在 40 份关节液中,猪链球菌阳性率为 22.5%,但未检出猪链球菌 2 型阳性;在 40 份扁桃体样品中,猪链球菌阳性率为 32.5%,其中猪链球菌 2 型阳性率为 7.5%。从 40 头猪的扁桃体和关 节液共 80 份样品中分离出 3 株猪链球菌, PCR 结果表明,3 株分离菌中 1 株为猪链球菌 4 型,基因型为 epfmrp+gdh+gapdh+fbps-orf2+sly-;其他 2 株为猪链球菌 9 型,基因型分别为 epf-mrp+gdh+gapdh+fbps-orf2+sly- 和 epf-mrp-gdh+gapdh+fbps-orf2+sly+。药敏试验表明,3 株猪链球菌菌株对青霉素 G、林可霉素、多粘菌素 B 和磺胺异恶唑耐药,对恩诺沙星、环丙沙星、大观霉素和阿莫西林敏感。【结论】该屠宰场猪群中存在猪链球 菌的隐性感染,提示存在猪链球菌 2 型感染人的风险。     

阳江地区某猪场塞内卡病毒抗原和抗体的检测与分析

塞内卡病毒是新发现的一种小RNA病毒,能使猪产生类似水疱样病变,并引起仔猪死亡。塞内卡病毒作为外来病原,近几年呈现蔓延趋势。从广东阳江地区某猪场采集病变组织和血清进行检测分析,针对塞内卡病毒VP1-2A基因进行RT-PCR扩增,得到特异性的单一条带。对PCR产物序列分析表明,与2015年美国毒株USA/GBI29/2015的同源性最高、为99.2%,而与我国2017年毒株CH-HN-2017的同源性为97.1%。将水泡皮处理后接种PK-15细胞,盲传4代产生显著病变,滴度可达107TCID50/0.1mL。对采集的16份血清进行抗体中和试验表明,发病种猪的抗体效价最高达到1︰4096,9头种猪全部感染SVA,发病率为66.7%,总感染率为68.8%。     

塞尼卡病毒与口蹄疫病毒双重RT-PCR鉴别检测方法的建立

2014~2015年,美国、巴西等国爆发了一种症状类似于口蹄疫的水泡性疾病,病原被确定为塞尼卡病毒A(Senecavirus A,SVA)。为了鉴别和诊断塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV),本研究针对塞尼卡病毒的VP1基因和口蹄疫的5’UTR基因,合成特异性引物,优化了反应体系和扩增条件,建立了一种可同时检测塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒的双重RT-PCR方法。特异性和敏感性试验结果表明,建立的双重RT-PCR检测方法特异性好,敏感性强,对塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒最低检出量分别为104 copies/μL、103 copies/μL。本研究建立的方法对临床快速鉴别塞尼卡病毒A和口蹄疫病毒感染具有重要意义。     

一株猪源停乳链球菌类马亚种的分离鉴定

【目的】停乳链球菌（Streptococcus dysgalactiae）可引起猪关节肿大和运动障碍，大大降低饲料报酬和猪场经济效益，近年研究提示停乳链球菌类马亚种（Streptococcus dysgalactiae subsp. equisimilis）是一种潜在的人兽共患病病原。对猪源停乳链球菌类马亚种进行研究，可为防治该病提供数据，具有公共卫生意义。【方法】2022 年 3 月广东省某规模化猪场出现仔猪关节肿大和跛行症状。为确定病因，无菌采集发病仔猪关节液进行细菌分离培养，对优势菌进行形态观察、生化鉴定、16S rDNA 基因序列分析、小鼠致病性试验及抗生素敏感性试验，并对其毒力基因进行 PCR 鉴定。【结果】根据分离菌株的形态特征、生化特性，结合 16S rDNA 序列测定与在线 BLAST 分析结果，确定其为链球菌属的停乳链球菌类马亚种。药敏试验结果表明，分离菌株对头孢曲松、头孢克洛、青霉素 G、头孢氨苄、头孢吡肟、环丙沙星、磺胺异恶唑、大观霉素、恩诺沙星敏感，对丁胺卡那、多西环素、多粘菌素 B、诺氟沙星、氨苄西林次敏感，而对卡那霉素、庆大霉素、链霉素、林可霉素、阿莫西林表现出耐药性。毒力基因 PCR 鉴定结果表明，分离菌株的基因型为 eno+napr+cfb-lmb+bca-bac-scpB+cyl+。小鼠致病性试验结果表明，分离菌株导致小鼠内脏病变和死亡，具有显著的致病性。【结论】首次报道了华南地区有关致病性猪源停乳链球菌病例，研究结果为临床猪源停乳链球菌病的防治提供参考。