黑曲霉葡萄糖氧化酶基因在毕赤酵母中的表达及性质研究

试验旨在提高葡萄糖氧化酶（glucose oxidase, E.C.1.1.3, GOD）的产量并进一步研究重组葡萄糖氧化酶的酶学性质及其对畜禽常见致病菌的体外抑菌效果。试验选取黑曲霉来源的GOD基因序列GOX4，经密码子优化后电击转入毕赤酵母，构建Pichia pastoris X33/pGAPZαA-GOX4重组菌，而后通过高浓度博来霉素筛选到一代高产葡萄糖氧化酶的重组菌。在此基础上，通过共表达糖酵解途径中的关键限速基因丙酮酸激酶基因BTS成功构建二代高产菌，并研究重组葡萄糖氧化酶的酶学性质，采用牛津杯法进行抑菌试验。结果表明：(1)第二代高产菌的GOD产量相比第一代提高了60%；(2)重组葡萄糖氧化酶的最适温度为50℃，最适pH为7.0；(3)稀释10倍和25倍的重组葡萄糖氧化酶发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌和铜绿假单胞菌均有一定程度的抑制效果，但效果有所差异。综上所述，共表达丙酮酸激酶基因BTS提高了重组葡萄糖氧化酶的表达，重组葡萄糖氧化酶的酶学性质及体外抑菌试验表明其在畜牧行业具有良好的应用潜力。