猪卵泡液与猪卵母细胞体外成熟与凋亡的关系

本研究就猪卵泡液对猪卵母细胞的体外成熟及凋亡进行了探索试验一证明,体外培养46-48h,成熟液添加5%猪卵泡液能促进成熟,核成熟率为41.2%,成熟液添加20%猪卵泡液则抑制成熟,核成熟率为23.1%,二者差异显著;试验二证明,添加猪卵泡液可以促进猪卵母细胞体外存活时间的延长,体外培养第16天,含0%、5%、10猪卵泡液的存活率分别为2.6%、22.2%、18.6%,添加与否差异显著.     

影响猪卵母细胞体外成熟的相关物理性因素

猪的研究是生物新技术中新的热点和经济增长点，猪的体外成熟是体外受精、性别控制、克隆及转基因等许多新技术成功与否的前提和关键，有许多物理方面的因素影响到猪的体外成熟。     

不同还原剂预处理精子对水牛ICSI介导转基因效果影响的初步研究

本研究探讨了还原剂β-巯基乙醇（β-ME）、二硫苏糖醇（DTT）及谷胱甘肽（GSH）预处理水牛精子对水牛ICSI介导转基因（ICSI-mediated gene transfer,ICSI-Tr）效果的影响。结果显示,β-ME、DTT和GSH预处理水牛精子对提高ICSI介导转基因的效果不显著（p〉0.05）,但GSH能显著提高2原核（PN）的形成率（p〈0.05）。     

不同精子处理对应用ICSI—Tr技术生产转基因水牛胚胎效率的影响

本文主要探讨了不同精子处理对应用显微授精介导（intracytoplasmic sperm injection-mediatedtrans-genesis,ICSI-Tr）生产转基因水牛胚胎效率的影响。本试验以p18T—BCN5．2-IFN-1．1pA—EGFP为载体,比较了精子的不同处理方式（NaOH和冻融）、NaOH处理精子不同时间（5min,10min,20min,30min和60minl以及不同外源DNA浓度（5ng／μL,10ng／μL,25ng／μL和50ng／μL）对ICSI-Tr转基因效率的影响。结果显示：NaOH处理组的囊胚EGFP表达率（46．1％）,与冻融精子处理组（47．1％1差异不显著,但发育率显著高于冻融处理精子组（28．3％VS16．7％,P〈0．05）。处理60min组和30min组的分裂率分别为78．9％和77．5％,显著高于20min、10min和5min组的64．0％、60．0％和64．0％（P〈0．05）,其中30min处理组的囊胚EGFP表达率高达44．4％,显著高于其它处理组（P〈0．05）。25ng／μL组和50ng／μL组的早期胚胎EGFP表达效率差异不显著（41．3％VS42．5％）,但显著高于5ng／肚组和10ng／μL组（22．5％和35．5％）,25ng／μL组的囊胚EGFP表达效率显著高于其它组（P〈0．05）。本研究优化了应用ICSI-Tr生产转基因水牛胚胎技术体系,为获得ICSI-Tr转基因水牛奠定了良好的工作基础。     

水牛受精卵胞质内注射转基因的初步研究(英文)

[目的]旨在探讨通过向水牛受精卵胞质内注射外源DNA实现转基因的可行性。[方法]水牛卵母细胞体外成熟20～22h后随机分为2组,①在体外受精7～10或18～20h后向卵胞质内注入约7.5pL50μg/ml含线性EGFP片段的DNA溶液;②则分别注入单个精子与约7.5pL50μg/ml含线性EGFP片段的DNA混合物,观察外源基因在胚胎发育过程中的表达情况。[结果]受精卵胞质内注射的早期胚胎基因表达率、囊胚基因表达率与ICSI-Tr差异不显著(P>0.05),且IVF7～10h时注射的分裂率、早期胚胎基因表达率均显著高于18～20h(P<0.05)。[结论]水牛IVF受精卵胞质内注射外源基因能获得转基因胚胎,且IVF后7～10h注射的效果优于IVF后18～20h注射。     

水牛卵母细胞去核方法的比较

水牛卵母细胞体外成熟22h后，分别用盲吸法、点击法和纺锤体成像系统（Spindle—View System）去核。结果，三者的去核率分别为65．1％、81．8％和95．0％，差异极显著（P〈0．01）。以水牛胎儿成纤维细胞为供体，通过核移植构建的重构胚的融合率、分裂率和囊胚发育率，在上述3种方法之间均没有显著差异（P〉0．05）。认为点击法是一种较为简单、实用和有效的去核方法。     

水牛体细胞核移植方法比较及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法核移植效果的影响

本研究旨在比较水牛2种体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transfer,SCNT)方法的效果以及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法(Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCICSI)核移植效果的影响.采用水牛胎儿成纤维细胞作为供核,比较了透明带下注核法(Perivitelline Microinjection,PM)和WCICSI核移植效果.另外,试验了不同类型的供体细胞进行全细胞胞质内注射后与激活前的受体胞质的最适宜作用时间.结果,WCICSI构建核移植重构胚的成功率显著高于PM(87.1%vs 81.1%,P＜0.05),虽然其重构胚的分裂率极显著低于PM(49.5%vs 71.8%,P＜0.01),但囊胚率、核移植的效率无显著差异(P＞0.05).卵丘细胞和胎儿成纤维细胞在注射后3 h激活,重构胚的囊胚发育率最高;颗粒细胞注射后与激活前的最佳时间间隔可在1.5～3 h,但3 h是最佳的作用时间.结果表明,(1)WCICSI可用于水牛体细胞核移植的研究;(2)水牛胞质内注射供体细胞后3 h进行激活,核移植重构胚的发育效果最好.     

葡萄糖在牛体外受精及胚胎发育中的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的葡萄糖,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行研究,通过观察顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率,筛选出获能液中最适葡萄糖浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度.结果表明:葡萄糖是精子获能和维持超激活运动的主要能源物质,其代谢过程中产生的活性氧在牛精子体外获能、受精过程中起重要作用,高浓度(超过9.15 mM)葡萄糖有利于获能的完成;但是对早期胚胎发育不利,对早期胚胎发育来说其最适添加量为6.10 mM,此时的囊胚率最高.     

供体细胞低温冷藏处理对水牛体细胞核移植效果的影响

自1997年《自然》杂志报道克隆羊“多莉”以来,多种哺乳动物的体细胞核移植相继取得了成功。然而,体细胞核移植的技术环节繁多,各种各样的因素影响着核移植的效果,核移植的效率仍然很低(牛,<5%)[1]。核移植效率的提高有赖于各个技术环节的完善,供体细胞的准备与处理是核移植中的一个关键环节,它直接影响到核移植的效果。低温冷藏供体细胞可以减少染色体变异的可能性,亦有利于重构胚的发育。研究探讨了水牛胎儿成纤维细胞经低温冷藏处理后对核移植效果的影响。1材料与方法1.1试剂及培养液的配制研究所用的试剂除TCM-199购自G ibco公司外,其…     

影响猪卵母细胞体外成熟的相关物理性因素

猪的研究是生物新技术中新的热点和经济增长点,猪的体外成熟是体外受精、性别控制、克隆及转基因等许多新技术成功与否的前提和关键,有许多物理方面的因素影响到猪的体外成熟。