粤东地区鸡球虫病流行病学调查

鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞造成的原虫病。为明确粤东地区鸡群中的球虫病流行情况,该研究于2018-2019年在粤东地区18个规模化养鸡场采集700份粪便样品,利用PCR方法检测样品中鸡球虫感染情况。结果显示,粤东地区的鸡球虫病总检出率高达95.71%(67/70),主要流行虫种为柔嫩艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫,检出率分别为55.71%(39/70)和48.57%(34/70)。1-25日龄肉鸡堆型艾美耳球虫的检出率最高,为69.23%;大于25日龄肉鸡柔嫩艾美耳球虫的检出率最高,可高达60%。分析发现粤东地区鸡球虫混合感染情况普遍存在,但单一虫种感染占比最高（42.86%）。本研究对粤东地区规模化养鸡场的鸡球虫病流行情况进行系统研究,为粤东地区鸡球虫病的综合防控提供理论依据。     

提高幼年温州蜜柑产量试验

1975年我队利用沿海风沙地种植温州蜜柑1,800株,计7片30亩。苗木由浙江黄岩引进,品系混杂,每片果园均有早、中、晚熟品系,尤以中熟品系为多,并多半是尾张品系。这些温州蜜柑1977年开始试产,1978年投产,收果1,800斤。到今年已是5年生的幼年结果树。早熟的品系在本地区表现较好,产量也高。但中、晚熟品系却表现迟结果,有的开花很多,结果很少,甚至5、6年了还不开花结果。为了解决光长树不长果的问题,进行如下三项研究:     

广东省猪十二指肠贾第虫感染现状和分子特征分析

【目的】 了解广东省不同地区猪源十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis,简称贾第虫)的流行现状和分子特征,并评估其人兽共患风险。【方法】 从广东省10个地区采集新鲜猪粪样品,采用显微镜镜检,并应用巢式PCR对贾第虫谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,gdh)基因进行扩增,根据扩增结果计算不同地区和生长阶段猪贾第虫的阳性率。对所有的PCR阳性产物进行测序,将获得的贾第虫gdh基因序列进行BLAST比对,确定贾第虫的基因型;运用Mega 7.0软件的最大似然法构建进化树。【结果】 贾第虫包囊呈椭圆形,囊壁较厚,大小为(10~14)μm ×(7~10)μm,具有明显纵向轴柱,细胞核分布于轴柱两侧。521份受检样品中共检测出94份PCR阳性样品,阳性率为18.04%(94/521),其中茂名和清远的阳性率较高,分别达40.00%(10/25)和35.06%(27/77);肇庆和韶关的阳性率较低,分别为3.90%(3/77)和8.57%(3/35);佛山、江门、阳江、河源、广州和惠州的阳性率分别为11.11%(2/18)、15.31%(15/98)、11.43%(4/35)、13.33%(4/30)、9.38%(3/32)和24.47%(23/94)。不同饲养阶段的猪群的阳性率调查发现,母猪的贾第虫阳性率(24.55%)显著高于断奶仔猪(13.30%)(P<0.05),与育肥猪的贾第虫阳性率(19.23%)差异不显著(P>0.05)。基于gdh基因序列的基因分型和系统进化分析共发现5种贾第虫亚集聚体,即集聚体AⅠ和集聚体E的4种不同亚型,包括集聚体E1、E2、E10和E13,其中61.70%(58/94)测序阳性样品属于集聚体AⅠ,38.30%(36/94)属于集聚体E的不同亚型。【结论】 广东猪源贾第虫的感染较普遍,不同地区和不同生长阶段的猪感染率存在一定差异。其中,人兽共患性集聚体AⅠ为优势亚集聚体,表明广东省猪源贾第虫存在人兽跨物种传播的风险,应重视该病可能引起的公共卫生问题。     

十二指肠贾第虫谷氨酸脱氢酶原核表达及动力学分析

为探索十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis)谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase, GDH)在滋养体中的分布和酶动力学等生物学特性，对GDH进行了克隆并构建原核表达质粒pET-28a-GDH,然后转化至BL21(DE3) plysS感受态细胞中经IPTG诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析，以Ni²⁺亲和层析纯化。对纯化的重组GDH进行体外酶动力学分析并免疫小鼠制备多克隆抗体，最后用间接免疫荧光技术对滋养体中的GDH进行定位。结果显示，贾第虫GDH的编码序列长1 350 bp,试验成功构建pET-28a-GDH重组表达质粒并诱导表达，重组蛋白约为49.7 ku,且大部分以可溶性形式存在。ELISA和Western blot结果表明，贾第虫GDH具有良好免疫原性，获得的多克隆抗体具有较强特异性。间接免疫荧光定位显示GDH主要位于滋养体的胞质中。酶动力学研究结果显示，GDH最适反应pH约为9.3、最适温度约为42℃,对L-谷氨酸和NADP⁺的Km值分别为4.485 mmol...