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采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。 相似文献
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诊断剂量法在黄曲条跳甲抗性监测中的应用 总被引:2,自引:1,他引:2
利用诊断剂量法测定的毒死蜱、丁硫克百威、氯氰菊酯3种杀虫剂的敏感个体与抗性个体诊断剂量分别为40和600mg.L-1、50和800 mg.L-1、63和1000 mg.L-1.根据诊断剂量,利用滤纸药膜法测定4个菜区黄曲条跳甲成虫的抗性个体频率,并与点滴法、浸叶法测定结果进行比较分析.结果表明利用诊断剂量法确定的平坡诊断剂量监测田间种群的药剂敏感性,基本上能够反映黄曲条跳甲田间种群的抗药性水平.因此,诊断剂量法也是一种可供选用的害虫抗性监测方法. 相似文献
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出口渔场灭鲑气单胞菌灭鲑亚种的分离鉴定 总被引:4,自引:0,他引:4
灭鲑气单胞菌 (Aeromonassalmonicida)属弧菌科 (Virbri onaceae)气单胞菌属 (Aeromonas) ,为革兰氏阴性短杆菌 ,在世界各地都有分布。本菌营养要求不高 ,专性需氧 ,可引起多种水生动物的传染病 ,主要有疥疮病等[1] 。近期澳大利亚等国家对我国出口的观赏鱼要求检疫此菌。为此 ,我们对上海地区所有的观赏鱼出口渔场开展了该病菌的监测工作 ,并在某渔场送检样品中分离到 1株革兰氏阴性杆菌。经鉴定为灭鲑气单胞菌灭鲑亚种 ,结果报告如下。1 材料和方法1.1 病原菌分离无菌取肾脏划线接种于TSA… 相似文献
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土地流转是农村资源优化配置的重要方式,在不同的地区,土地流转率存在较大的差异,一般认为经济越发达,农户土地流转的意愿越高,土地流转越频繁.但在发达地区,土地流转率都比较高的情况下,具体的土地流转行为仍然存在较大的差别.该研究基于对浙江省余姚市、临安市和丽水市3个地区的调查,分析各地区农户土地流转行为的差异,结合地区经济状况分析造成这些差异的原因,并就如何提高土地流转效率、缩小土地流转的地区差异提出政策建议. 相似文献
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蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。 相似文献