犬细粒棘球绦虫粪抗原间接夹心ELISA检测方法的建立

本试验旨在建立犬细粒棘球绦虫粪抗原间接夹心ELISA检测方法,并将该方法的检测结果与镜检结果作对比。结果表明,两者阳性符合率为86.36%,总体符合率为90%。该方法的成功建立为后期研制犬细粒棘球绦虫粪抗原间接夹心ELISA检测试剂盒奠定了基础。     

巴音布鲁克镇周围散养马消化道寄生虫病感染情况调查

目的：为了解巴音布鲁克散养马消化道寄生虫的感染情况。方法：采用寄生虫病病原（粪便）常规检查法及EPG检查法对该地区的散马消化道寄生虫进行调查。结果：消化道寄生虫总感染率为81.67%（98/120）；其中线虫感染率为75.83%（91/120），球虫感染率为15.83%（19/120），大部分为混合感染。经EPG调查，每克马粪便平均感染525个虫卵。结论：经本实验对随机采样的巴音布鲁克散养马体内寄生虫有了初步了解，对以后长年考察该镇马寄生虫的感染情况及当地散养马业的健康发展提供了科学依据。     

和静县部分乡村绒山羊新孢子虫病的血清学调查

用重组抗原ELISA对新疆和静县5个乡镇的267份绒山羊进行了新孢子虫病血清抗体的检测。共检测出新孢子虫抗体阳性血清样品43份,5个乡绒山羊阳性率为3.7%～20%之间,其平均感染率为16.1%,其中感染率最低的为协比乃尔布呼乡,最高的为克尔古提乡。该实验结果证明本地区有些乡镇的绒山羊群中存在新孢子虫感染的情况,需加强防范。     

用重组抗原与商品化试剂盒对比检测牦牛的新孢子虫与弓形虫感染

用纯化的特异性重组抗原NcSRS2和TgSAG2作为包被抗原,经rELISA方法和商品化试剂盒,对采自新疆部分山区牦牛血清样品分别进行了新孢子虫和弓形虫抗体检测.rELISA检测结果显示,新孢子虫阳性率为5.4％(16/192),弓形虫阳性率为1.7％(5/192),与IDEXX公司新孢子虫试剂盒和北京永辉公司试剂盒符合率分别为98.9％、100％,未发现交叉感染的样品.表明建立的rELISA方法特异性好、重复性良好.     

库车地区犬、猫感染弓形虫的调查研究

弓形虫病是当今社会严重危害人类和动物健康的一种细胞内寄生性原虫病。采用r ELISA检测法对采自新疆库车地区犬血清和猫血清进行了弓形虫抗体检测。结果显示,犬弓形虫阳性率为25.95%(68/262),猫弓形虫阳性率为39.08%(34/87),阳性率较高,应加强对该病的宣传并采取积极的措施进行预防。     

基于Nc2和Nc5基因的新孢子虫PCR方法的建立

本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231 bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499 F/SN/T 3499 R的最低检测量相同,为19.9 fg/μL,F2/R2最低检测量为199 fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9 pg/μL和199 fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。     

检测牛感染犬新孢子虫的TaqMan-MGB Real-time PCR方法的建立

为建立牛感染犬新孢子虫的Real-time PCR检测方法,根据犬新孢子虫Nc2基因保守序列设计特异性检测引物和TaqMan-MGB探针,建立新孢子虫病TaqMan-MGB Real-time PCR检测方法。PCR扩增产物约为150bp,与预期片段大小相符;Real-time PCR扩增表明,Ct值与梯度稀释的阳性质粒模板呈良好的线性关系;当检测牛源性弓形虫、牛环形泰勒和牛巴贝斯等虫种阳性DNA时均为阴性;经3D数字PCR判定,Real-time PCR方法的最低有效检测量为6.41拷贝/μL,灵敏性是常规PCR的1 000倍;重复性试验的组内平均变异系数为1.108%,组间为2.732%;本方法与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)的检测符合率为100%(46/46)。该Real-time PCR方法可用于早期诊断和日常监测家畜感染犬新孢子虫。     

重组产气荚膜梭菌α毒素对家兔的安全性和免疫效力评价

为探究重组产气荚膜梭菌α毒素对家兔的安全性和免疫保护效力，本研究构建了含产气荚膜梭菌α毒素基因的重组质粒p VL1393-CPA，并通过BD BaculoGold TM转染试剂盒转染Sf9细胞后，经噬斑纯化获得单克隆重组病毒，将其感染High 5细胞进行表达，表达的重组蛋白经SDS-PAGE和western blot检测，结果显示均获得了45 ku的目的蛋白，即为重组α毒素。将重组α毒素用0.1%甲醛溶液灭活脱毒后与ISA 206 VG佐剂乳化制备亚单位疫苗(抗原含量为20μg/m L)，以40μg/只肌肉注射体质量1.5 kg～2.0 kg的家兔，同时设PBS对照组，注射后连续观察7 d，结果显示实验兔临床观察无异常，该疫苗对家兔的安全性良好。随后以20μg/只肌肉注射家兔，免疫21 d后以相同剂量加强免疫一次，同时设佐剂对照组和α毒素对照组，首免21 d、二免14 d时采血分离血清，采用ELISA方法检测免疫兔血清Ig G抗体效价，同时进行二免血清小鼠体内毒素中和试验以及家兔攻毒免疫保护试验，以评价该疫苗对家兔的免疫保护效力。结果显示，疫苗免疫组家兔血清Ig G抗体效价比佐剂对照组...