猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究

试验旨在对猪SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease 1,SENP1)基因CDS区进行克隆和生物信息学分析,并探讨SENP1基因在乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染PK15细胞后的表达情况。根据GenBank中公布的猪SENP1基因预测序列(登录号:XM_013997974.2)设计特异性引物,通过RT-PCR和T/A克隆技术对猪SENP1基因CDS区序列进行克隆测序,并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR分析猪SENP1基因在JEV感染PK15细胞不同时间点(0、12、24、36、48 h)的表达情况。结果显示,猪SENP1基因CDS序列全长2 034 bp,共编码677个氨基酸。序列比对和系统进化树分析结果表明,猪SENP1蛋白序列和山羊、犬、人、牛的相似性分别为94.8%、94.2%、93.9%和93.8%,说明在这些物种中SENP1的保守性较强;猪与犬的SENP1分子亲缘关系较近。生物信息学分析结果显示,猪SENP1蛋白相对分子质量为76 825.76,等电点为8.53,体外半衰期为30 h,不稳定系数为53.59,总平均亲水指数为－0.622。SENP1蛋白不含信号肽序列,无跨膜结构域。二级结构分析结果显示,SENP1蛋白中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角分别占31.31%、46.68%、16.25%和5.76%。三级结构分析结果显示,猪SENP1蛋白中存在8个α-螺旋区和7个β-转角区。实时荧光定量PCR结果显示,猪SENP1基因在JEV感染的PK15细胞中呈现上调表达趋势,其中在感染后48 h SENP1基因表达量显著高于对照组(P<0.05)。本试验结果为后续深入研究SENP1基因功能提供了参考。     

中国南海周边犬类贾第虫感染情况调查与基因序列分型

贾第虫是一种人兽共患肠道寄生原虫,在全世界范围内传播,其感染率与地区和环境有非常大的关系。为了解中国南海周边国家和地区犬类贾第虫感染情况,判断海洋隔离是否是影响贾第虫传播的重要因素,自2018年6月至2019年7月,从中国广州、越南胡志明市、马来西亚吉隆坡、新加坡和菲律宾马尼拉分别采集犬类粪便样本616份。提取每个地区犬类粪便样本的DNA,以贾第虫磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase)基因TPI和BG(genotyping at the beta giardin)基因制作巢式PCR引物。提取的犬粪基因组DNA为模板进行巢式PCR扩增,确定其阳性感染率,PCR阳性产物经测序并将结果与GenBank中的贾第虫序列比对,判断其分型。结果发现,616份样品中,有48份样品检验结果为贾第虫感染阳性,阳性率为7.79%(48/616)。不同地区感染率分别是:中国广州4.81%、越南胡志明市6.90%、马来西亚吉隆坡9.09%、新加坡2.86%和菲律宾马尼拉11.52%。其中48份样品在TPI和BG位点分别检测到条带,阳性率分别为7.63%和5.19%。阳性样品再经过对于BG及TPI基因位点的测序比对,得知BG位点有集聚体B型(3.33%)、集聚体C型(86.67%)、集聚体D型(10%),TPI位点有集聚体B型(2.12%)、集聚体C型(85.1%)和集聚体D型(12.76%)。综上,中国南海周边地区存在贾第虫感染,公共卫生相对较好地区感染率较低,犬源贾第虫基因分型分布未明显受到海洋地域隔离影响。     

茶多酚对朗德鹅产肝性能和血清脂类成分的影响

采用单因素试验设计方案。将14周龄、体重相近的健康公朗德鹅150只随机分成5组,每组30只,每只一个重复。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮基础上分别添加40、80、160、320mg/kg茶多酚,以研究茶多酚对朗德鹅产肝性能和血清脂类成分的影响。试验结果表明,1)160mg/kg添加组肥肝重、肝屠比,与对照组和320mg/kg添加组均差异显著(P<0.05),肝体比与对照组和320mg/kg添加组差异均显著(P<0.01)。2)320mg/kg添加组血清甘油三酯含量(TG)与对照组和其他试验组差异均显著(P<0.05);320mg/kg添加组血清总胆固醇含量(TC)与对照组差异均显著(P<0.05),与其他试验组差异不显著(P>0.05);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)各组差异均不显著(P>0.05)。试验结论:在玉米型日粮添加40￣160mg/kg均能提高朗德鹅产肝性能,添加160mg/kg茶多酚朗德鹅产肝性能最佳,添加320mg/kg茶多酚能显著降低血清TG和TC含量。     

建立长效机制 加强森林草原地方消防队伍建设

森林草原火灾突发性强,扑救难度大,危害严重。如何快速组织扑救,减少林草资源损失,事关国土生态安全,事关人民群众生命财产安全,事关改革发展稳定大局。因此,建立一支综合素质好,懂扑救火灾业务,熟悉各种扑火机具,训练有素的地方森林草原消防队伍十分必要。     

用冻干精子生产ICSI小鼠

前期研究中，我们采用小鼠卵母细胞胞浆内精子注射（ICSI）技术，成功地用新鲜精子获得了生理健康的ICSI小鼠。在此基础上，本文结合细胞冻干技术，进行了冻干精子ICSI生产试管小鼠的尝试。B6D2F1成年公鼠的精子在Tris-HCl-EDTA（pH8.2）溶液中冻干4 h后解冻，将其精子头注入到KM小鼠成熟卵母细胞的胞质中。6 h后，83.0%的卵子受精。用CZB溶液体外培养发现，冻干精子生产的胚胎，体外发育至2-C (92.0% vs 99.5%)、4-C（52.7% vs 97.2%）、桑椹胚（36.6% vs 86.3%）和囊胚的比例（21.4% vs 68.7%）极显著地（p<0.01）低于新鲜精子生产的ICSI胚胎。移植2-C期冻干精子ICSI胚胎检测体内发育，结果发现，D10的着床率为63.0%（17/27）；胎鼠的出生比例为21.7%（13/60），这些ICSI小鼠成年后的生理和生殖能力正常。试验结果说明，精子冻干后，仍能生产ICSI动物，冻干技术可以用于哺乳动物精子的保存。     

猪GRP78基因克隆、生物信息学分析及组织表达谱研究

本研究旨在克隆猪葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78，GRP78）基因，并进行生物信息学分析，探讨其在猪不同组织中的表达情况。根据GenBank上公布的猪GRP78基因序列（登录号：XM_001927795.6）设计引物，PCR扩增及测序获得猪GRP78基因CDS序列，使用在线软件分析GRP78的理化性质、跨膜结构、信号肽、疏水性、保守结构域、二级结构和三级结构，并进行同源性比对及系统进化树构建，利用实时荧光定量PCR方法检测猪GRP78基因在各组织中的表达情况。结果显示，猪GRP78基因CDS区长1 965 bp，可编码654个氨基酸。生物信息学分析表明，GRP78理论分子质量为72.3 ku，等电点（pI）为5.06，半衰期为30 h，其水溶液在280 nm处的消光系数为30 495，肽链N端为蛋氨酸（Met），不稳定系数为32.39，属于稳定蛋白。脂肪系数为85.40，总平均疏水指数为-0.496，无跨膜结构，存在信号肽序列，说明该蛋白属于分泌型蛋白；GRP78蛋白只包含1个超家族保守结构域：HSP70结构域。蛋白二级结构分析显示，GRP78蛋白中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别为40.06%、20.49%、8.10%和31.35%。同源性比对结果显示，猪GRP78基因与人（登录号：NM_005347.4）、小鼠（登录号：NM_001163434.1）、大鼠（登录号：NM_013083.2）、山羊（登录号：XM_005687138.3）、牛（登录号：NM_001075148.1）核苷酸序列的同源性分别为93%、91%、90%、95%、95%，氨基酸序列的同源性分别为99%、98%、98%、99%、99%，各个物种之间GRP78基因保守性较高。实时荧光定量PCR结果显示，GRP78基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、胃、卵巢、输卵管、乳腺、小脑、大脑、垂体等组织中均有表达，在心脏、脾脏、肺脏中相对高表达。本研究结果为今后深入研究GRP78基因的生物学功能提供了基础材料。     

浙东白鹅催乳素选择性剪接体基因克隆和活性初步鉴定

催乳素(Prolactin,PRL)在家禽卵泡发育和就巢行为中扮演着至关重要的调控角色。本研究深入剖析了浙东白鹅的PRL基因选择性剪接体及其蛋白结构,进而发现了一种新的剪接体PRL-S。利用生物信息学软件,对2种剪接体的mRNA和蛋白序列进行了详尽的对比分析,成功获取了PRL-L和PRL-S的全长CDS序列。在对比中,发现PRL-S缺乏信号肽,且其N端缺失了57个氨基酸,其N端的前19个氨基酸序列与PRL-L存在显著差异。进一步对PRL-S蛋白的二级结构分析,发现其N端的第一个α-螺旋已完全消失。为了深入研究PRL-S的生物学功能,利用原核表达系统成功制备了高纯度的PRL蛋白,并通过pET28a原核表达系统对重组PRL蛋白进行了表达。随后,通过CO-IP和双荧光素酶报告系统等试验,证实了PRL-S重组蛋白确实具有一定的生理活性。本研究不仅为深入理解浙东白鹅的PRL基因选择性剪接体在就巢行为调控中的作用提供了重要线索,同时也为通过调控这些剪接体来提高浙东白鹅的产蛋量奠定了坚实的理论基础。     

光照时间对就巢期浙东白鹅血清生理生化指标、盲肠挥发性脂肪酸和肠道菌群的影响

本试验旨在探究光照时间对就巢期浙东白鹅血清生理生化指标、盲肠挥发性脂肪酸和肠道微生物组成的影响.选取16只220日龄、体重相近且健康正常的浙东白鹅,随机分为2组,每组6个重复.长光照组和短光照组每日分别给予15 h(15L:9D)和9 h(9L:15D)的人工光照,饲养管理条件相同,试验期60 d.试验结束后采集鹅血清...     

集体林权制度改革的政策困境与对策研究

正集体林权的制度提出是我国为改善生态环境,提高人们生活水平的重要发展政策。从国家的生态、经济、文化、政治方面来说,国家将科学发展观以及可持续发展的政策严格实施到各个领域的前景规划当中,集体林业的建设是为了提高国家绿化面积,增加林业资源的有效建设,集体林权制度改革的实施政策在目前的市场经济条件下面临着一定的阻碍和困境;林业生产作为我国集体林业的重要发展指标,也存在着一定的发展中问题。基于此,本篇文章通过分析集体林权制度的改革所面     

鹅IDH1基因的分离、序列分析及表达特征研究

为阐明鹅肥肝形成的机制,使用mRNA差异显示技术研究朗德鹅和淑浦鹅在超饲养和正常饲养条件下肝脏基因表达差异.基因IDH1被证实在2个品种鹅肝脏中表达受到显著抑制(P<0.05).结果,得到了该基因1269 bp的CDS序列,与鸡IDHI有95%的同源性.序列分析表明,该序列含有1个1 248 bp的开放读码框(ORF),编码含415个氨基酸的蛋白质,该蛋白质序列存在1个保守结构域Icd,与其它物种该蛋白的同源性分别为:鸡99%、大鼠89%、人90%、猿90%、牛88%、小鼠88%.应用生物信息学的方法对该蛋白质的功能和结构进行了分析.组织表达分析表明,鹅IDH1基因在肝脏中表达丰富,在脾、肾和肌胃中中等表达,在其它组织中表达量较低.研究结果显示,超饲可以抑制鹅肝脏IDH1基因mRNA的表达.