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【目的】研究miR-140-5p在前脂肪细胞(3T3-L1)成脂分化过程中的功能及其作用机制。【方法】待3T3-L1细胞汇合度达100%时诱导其成脂分化,收集分化第―1(诱导分化前1 d)、0、1、2、3、5、7天的细胞,用实时荧光定量PCR检测miR-140-5p相对表达量;将miR-140-5p mimics、NC转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化,油红O染色观察脂滴形成情况,实时荧光定量PCR检测成脂标志基因CAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、CAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)相对表达量;利用miRandn和TargetScan在线网站预测miR-140-5p的靶基因;通过对比序列差异分析P300/CBP相关因子(PCAF)的3′-UTR序列中与miR-140-5p的结合位点序列在小鼠、人等不同物种间的序列保守性。将miR-140-5p mimics、inhibitor、NC转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化,实时荧光定量PCR检测miR-140-5p、PCAF相对表达量,Western blotting检测PCAF蛋白水平... 相似文献
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