印度芥菜BjSMT基因的克隆及抗硒分析

通过同源克隆技术首次克隆了硒富集模式植物印度芥菜的硒代谢关键酶(硒代半胱氨酸甲基转移酶)基因,命名为BjSMT。该基因全长1865bp,包含5个内含子序列和6个外显子序列,共编码346个氨基酸。系统发育树分析显示该基因与芸薹属甘蓝(Brassica oleracea L.)亲缘关系最近。qPCR分析发现,在低浓度硒处理下,BjSMT基因转录水平迅速提升后达到平稳,在12h达到峰值,约是对照的2.62倍。对转BjSMT烟草Na_2SeO_3胁迫研究发现,在0~240μmol/L不同Na_2SeO_3浓度胁迫下,BjSMT过表达烟草的长势明显优于转空载体烟草,在120μmol/L胁迫浓度下差异最大,株高、鲜重、谷胱甘肽过氧化物酶活性等差异最显著。表明,BjSMT可迅速增强表达响应环境硒胁迫,在植物中过表达BjSMT可显著提高其耐硒能力,为更深入研究印度芥菜富硒机理及转基因应用奠定了基础。     

印度芥菜BjJ10-2基因原核表达载体构建及抗盐功能的鉴定

利用RT-PCR技术克隆了印度芥菜核糖体相关膜蛋白RAMP4家族成员BjJ10-2基因的开放读码框,成功构建了pET32a-BjJ10-2原核表达栽体,通过热激法将其转化到原核表达菌株BL21(DE3)plysS中,得到重组大肠杆菌BL21(pET32a-BjJ10-2).SDS-PAGE凝胶电泳检测到在IPTG诱导下BjJ10-2在BL21菌株中获得表达.利用分光光度计检测重组大肠杆菌BL21(pET32a-BjJ10-2)和对照菌株BL21(pET32a)的抗盐性,结果表明,过表达BjJ10-2的BL21菌株的抗盐性明显高于对照茵株,其抗NaCl的浓度可高达0.8mol/L.半定量RT-PCR的结果表明BjJ10-2基因响应盐胁迫,在印度芥菜根部其mRNA转录丰度显著增强,在8～12h达到峰值.说明BjJ10-2是一个新的盐胁迫响应基因,可能在植物抗盐生理过程中扮演重要角色.     

中国北方冬麦区主栽品种醇溶蛋白组成的遗传演变分析

用改良的pH3.2A-PAGE技术分析了我国北方冬麦区建国后不同时期的51个主栽品种和21个骨干亲本的醇溶蛋白组成及其遗传演化规律.结果表明,供试主栽品种具有丰富的醇溶蛋白变异类型,是今后小麦育种的重要物质基础.本实验材料共分离出72种醇溶蛋白组分,供试主栽品种含有其全部组分,其单品种谱带数目在21～41之间,品种间各类蛋白组     

适合我国小麦醇溶蛋白“指纹图谱”绘制的改良APAGE分子标记技术

依据ＩＳＴＡ的Ａ－ＰＡＧＥ标准方法,摸索出一套适合国产仪器及药品快速,准确,经济,实用的麦醇蛋白指纹图谱绘制技术,克服了国内其它改良方法剥胶困难,分辨率不高,实验效率较低的弊病,并对谱带识别方法进行了改进,为我国小麦核心种质指纹图谱绘制及品质分布和品种鉴别等方面提供了可靠技术手段。     

中国北方冬麦区主栽品种醇溶蛋白指纹图谱数据库的建立

结合CAWGES软件，用改良的pH3.2 A-PAGE技术绘制并构建了我国北方冬麦区建国后不同时期的主栽品种及其部分骨干亲本共68个品种的标准麦醇溶蛋白指纹图谱及其数据库。并利用数据库在图谱分析、品种鉴定及血缘关系研究等方面进行了应用探讨，为建立小麦核心种质及品种鉴别提供了有效手段。     

小麦品种资源微机辅助鉴定分析系统CAWGES的研制

当前国内小麦品种产量徘徊不前,品质性状也不能满足人民对食品营养和质量的消费需求,急待开发利用新种质。我国小麦品种资源丰富,生态类型各异,性状千差万别,这为小麦育种提供了重要物质基础。但限于技术手段和科学水平,过去对种质资源的鉴定利用主要依靠植株表型性...     

中国北方冬麦区主栽品种醇溶蛋白指纹图谱数据库的建立

 结合CAWGES软件 ,用改良的pH3.2A PAGE技术绘制并构建了我国北方冬麦区建国后不同时期的主栽品种及其部分骨干亲本共 6 8个品种的标准麦醇溶蛋白指纹图谱及其数据库。并利用数据库在图谱分析、品种鉴定及血缘关系研究等方面进行了应用探讨 ,为建立小麦核心种质及品种鉴别提供了有效手段。     

小麦淳溶蛋白电泳指纹鉴定和分析的微机辅助系统

“小科醇溶蛋白电泳指纹鉴定和分析的微机辅助系统”是配合Ａ－ＰＡＧＥ技术建立的,以Ｔｕｒｂｏ Ｃ为编程语言和开发环境,可在８０３８６及其以上微机运行。系统实现了大量小麦种质醇溶蛋白电泳指纹档案的微机管理和对小麦品种及其特征谱带准确、快速的搜寻、鉴定及遗传分析,亦适于小麦分类、演变和亲缘关系等方面的研究应用。介绍了系统的基本结构、主要功能、特点及应用实例。     

蒙古冰草肌动蛋白基因(MwACT2)克隆与表达分析

本研究应用RT-PCR和RACE技术,从蒙古冰草(Agropyron mongolicum Keng)中分离到1个肌动蛋白基因,命名为MwACT2。序列分析表明:MwACT2基因全长1506bp,含有1个1131bp的开放型阅读框,MwACT2蛋白长度为376个氨基酸残基,分子量为41.606KDa,理论等电点为5.29,含有actin保守位点,属于actin家族成员。该基因编码的氨基酸序列与Genebank中乌拉尔图(Triticum_urartu)肌动蛋白(登录号:EMS62134.1)氨基酸具有99%的一致性,属于非跨膜蛋白。利用半定量RT-PCR技术分析MwACT2基因的表达,结果表明该基因表达稳定,经高盐、干旱、低温处理后的表达强度无显著差异。