策勒黑羊发情周期不同阶段卵巢LNC-010801和LNC-008562表达规律的研究

为研究策勒黑羊卵巢组织发情周期LNC-010801和LNC-008562 LncRNA表达规律,以策勒黑羊为实验材料,采集发情周期不同阶段卵巢组织并提取总RNA,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,分别对LNC-010801和LNC-008562进行检测。结果表明:LNC-010801和LNC-008562在策勒黑羊发情周期不同阶段卵巢组织中均有表达,呈现动态变化趋势。LNC-010801在发情前期表达量最高,显著高于发情期(P0.05)和发情后期(P0.05);LNC-008562在发情期表达量最高,显著高于发情前期(P0.05)和发情后期(P0.05),极显著高于发情间期(P0.01)。这一研究结果可为后续策勒黑羊多胎性状的分子调控机理研究奠定基础。     

过表达miR-665对绵羊黄体细胞StAR、3β-HSD和孕酮表达水平的影响

本实验旨在研究过表达miR-665对绵羊黄体细胞类固醇激素调节基因StAR、3β-HSD表达水平以及孕酮（P4）分泌水平的影响。通过miR-665模拟物及阴性对照物与绵羊黄体细胞共转染,设置空白对照组,48h后在不同转染组中分别检测miR-665的表达水平和StAR、3β-HSD的mRNA、蛋白表达水平及P4分泌水平变化。结果表明：与空白对照组和阴性对照组相比,miR-665模拟物组中miR-665的表达量极显著升高;同时,孕酮合成关键基因StAR、3β-HSD的mRNA和蛋白表达量极显著增加,分泌水平极显著升高。综上,过表达miR-665能够促进黄体细胞内StAR、3β-HSD基因表达和P4分泌,其在绵羊黄体内分泌功能调控过程中发挥重要作用。     

萨×哈杂交母羊GHRH基因与生长性状关联分析

为探讨GHRH基因作为绵羊生长性状候选基因的可能性,寻找与绵羊生长性状相关的分子标记,对萨福克羊与哈萨克羊杂交成年母羊GHRH基因rs400079090和rs419322328位点的多态性及其与生长性状的关联性进行了研究。结果表明：rs400079090位点检测到3个基因型,rs419322328位点TT基因型缺失;rs419322328位点GG基因型个体胸宽显著大于GT基因型个体（P〈0.05）,体斜长极显著小于GT基因型个体（P〈0.01）。说明GHRH基因2个SNP位点多态性对萨福克羊与哈萨克羊杂交成年母羊生长性状有一定的影响,可以作为进行绵羊生长性状分子标记辅助选择的候选基因。     

奶牛隐性乳房炎抗性相关基因多态性与体细胞评分关联分析

为了探讨中国荷斯坦奶牛隐性乳房炎相关基因NOD2c.4500、CXCR1+777、SPP1-1301、 TLR4+2021、CXCR2+777、 BRCA1c.46126单核苷酸多态性(SNPs)位点与体细胞评分的关联性,试验利用PCR-SSCP及Sanger测序技术对135头中国荷斯坦奶牛的6个SNPs位点进行基因分型,分析SNPs位点与中国荷斯坦奶牛体细胞评分的相关性,并运用多座位外显方差分析法(MPVA)对不同多基因聚合与奶牛体细胞数的相关性进行研究。结果表明：在6个SNPs位点上均检测到碱基突变,在NOD2c.4500 C>A、CXCR1+777 G>C、SPP1-1301 G>A、TLR4+2021 C>T位点上均检测到3种基因型,其中优势基因型分别为CA、CC、AA、CC,优势等位基因分别为A、G、A、C。在CXCR2+777 G>C、BRCA1c.46126 G>T位点上均检测到2种基因型,其中优势基因型均为GG,优势等位基因均为G。SPP1-1301 G>A、TLR4+2021 C>T位点均处于低度多态(PIC<0....     

前列腺素D2与F2α对绵羊黄体退化的影响及其机理研究

旨在研究前列腺素（prostaglandins,PGs）D₂与F_2α对绵羊黄体（corpus luteum,CL）组织形态、生殖激素及其关键基因与受体表达的影响,并解析其在黄体退化中的相互关系及机理,为保证母畜连续性繁育提供新的理论依据。将16只哈萨克绵羊随机分成4组,在发情周期的黄体期分别子宫肌内注射PGD₂、PGF_2α、PGD₂+PGF_2α及等量生理盐水（对照组）,采用HE染色结合物理拍照对比处理前后黄体组织形态变化,ELISA法检测外周血清中P₄、E₂、PGD₂和PGF_2α浓度变化;并利用qRT-PCR和Western blot检测关键合成酶基因HPGDS、PGFS及其受体DP1、CRTH2、FP的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比,发现PGD₂+PGF_2α组中黄体退化效果最明显,随后依次是PGF_2α组明显大于PGD₂组。ELISA结果显示,随着处理后时间的推移,不同试验处理组中,P₄浓度均呈显著下降趋势（P<0.05）,其中在PGD₂+PGF_2α组中该变化趋势最显著（P<0.05）;但E₂、PGD₂和PGF_2α浓度均呈现不同差异性变化,其中,PGD₂+PGF_2α组中PGD₂和PGF_2α浓度呈显著下降（P<0.05）,PGF_2α组中E₂浓度呈显著升高（P<0.05）、PGD₂浓度呈显著下降（P<0.05）,PGD₂组中E₂浓度呈显著下降趋势（P<0.05）、PGD₂浓度呈显著升高趋势（P<0.05）。qRT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,PGD₂+PGF_2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量显著下调（P<0.05）,PGFS、CRTH2及FP mRNA和蛋白表达量显著上调（P<0.05）;PGF_2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量呈显著下调（P<0.05）,其它基因mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）;PGD₂组中HPGDS、DP1、PGFS及FP mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）。同时,在不同受体基因表达量检测时,发现PGD₂组中DP1受体表达量显著高于CRTH2受体（P<0.05）,而PGF_2α组中CRTH2表达量则显著高于DP1（P<0.05）。综上,PGD₂无论单独使用还是结合PGF_2α使用,均能够促进CL的退化,尤其是二者结合时有明显的协同促溶效应,其作用机制可能与其体内激素水平、关键合成酶及受体类型的表达有关,这为全面认识哺乳动物CL退化的调控机制奠定了基础,也为进一步优化高效繁殖技术（尤其是PGs方案）提供了新的思路。     

不同水平酪氨酸对体外培养绵羊下丘脑神经细胞分泌GnRH的影响

实验旨在验证脑内神经递质酪氨酸(Tyrosinase,Tyr)通过调控多巴胺的合成,作用于下丘脑神经细胞分泌的促性腺激素释放激素(GnRH)能够引起绵羊发情的可能浓度和机制.本实验分别对绵羊下丘脑神经细胞采用0(对照组)、0.02、0.2、2 mmol/L Tyr处理,24 h后检测绵羊发情相关基因DRD1蛋白、mRN...     

萨×哈F_1代及回交群体CAMKMT基因多态性与生长性状的关联分析

钙调蛋白赖氨酸转甲基酶(CAMKMT)基因在赖氨酸降解通路中具有重要作用,是绵羊生长性状的一个重要候选基因。本研究对萨福克羊与哈萨克杂交F_1代成年母羊、回交群体4月龄羔羊CAMKMT基因rs411221065、rs162300069、rs425859722位点的多态性以及与生长性状的关联性进行分析。结果表明:rs411221065、rs162300069、rs4258597223个SNP位点均检测到3个基因型,rs411221065、rs162300069属于中度多态,rs425859722属于低度多态;在F_1代成年母羊群体中,rs425859722位点CC基因型个体胸宽极显著低于CT基因型(P0.01)、臀宽极显著低于CT和TT基因型(P0.01),rs411221065位点CC基因型胸宽显著低于CT和TT基因型(P0.05),rs162300069位点GG基因型体高显著高于AG基因型、胸宽显著高于AA基因型(P0.05)。结果提示,绵羊CAMKMT基因3个SNP位点多态性对F_1代成年母羊生长性状有一定的影响,可以作为进行绵羊生长性状分子标记辅助选择的候选基因。