排序方式: 共有54条查询结果,搜索用时 15 毫秒
1.
应用蚀斑方法将SY-45毒株经过3次蚀斑纯化直到蚀斑大小相对稳定。从不同大小的蚀斑中挑选出三种蚀斑,大斑直径约3mm(简称LP)、中斑约2mm(简称MP)、小斑约1mm(简称SP)。分别在MDCK细胞上增殖并进行了三种不同大小斑毒对犬的毒力、免疫原性和在MDCK细胞上产毒量比较,以筛选最佳的疫苗株,试验结果表明用不同大小蚀斑病毒大剂量人工感染易感犬后,所有的试验犬临床症状和病理解剖学和病理组织学表现均正常;对挑选的4窝CAV HI抗体效价小于等于1:2的健康幼犬进行免疫试验,测定血清的中和抗体效价和血凝抑制抗体效价,结果表明:大斑毒的免疫原性要稍高于中斑毒,而明显高于小斑毒;不同大小蚀斑毒在MDKC细胞上产毒量差异很大,大斑毒可达10^7TCID50/mL、小斑毒达10^6TCID50/ml、小斑毒达10^4.5TCID^50/mL。综合所有试验结果表明:大斑毒株具有产毒量高、安全性好、免疫原性强的优点,是较为理想的疫苗株。 相似文献
2.
犬细小病毒核酸疫苗制备及免疫试验 总被引:1,自引:1,他引:0
以犬细小病毒基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增了全长VP1基因,PCR产物经纯化和NotⅠ/BamHⅠ双酶切后与同样处理的真核表达载体pIRES进行连接,转化到感受态细胞JM109中,筛选了真核重组表达质粒pIRESVP1,并进行了序列测定。对6只9月龄犬分别接种不同剂量的pIRESVP1或空载体质粒及生理盐水,8周接种1次,每次接种前采血,测定血清的血凝抑制抗体效价,第2次免疫后即可检测到较高的血清效价。在第3次接种4周后,对全部实验犬进行攻毒,攻毒后第7天及第14天时采血,测定血清的血凝抑制抗体效价。所有接种pIRESVP1疫苗的犬均能抵抗CPV强毒的攻击,而接种空载体质粒和生理盐水的对照犬则全部发病。证明所构建的核酸疫苗(pIRESVP1)能使犬免受犬细小病毒强毒的感染。 相似文献
3.
早在 8 0年代中期 ,国外就已研制出弱毒苗和灭活苗对犬进行免疫研究 [1,2 ] ,国内开展犬冠状病毒( CCV)的研究起步较晚 ,但发生 CCV性肠炎的报道很多 ,且远比国外报道的严重。 1 997年 ,胡桂学等 [3 ]利用犬胎原代细胞从一肠炎犬病料中成功分离获得 1株 CCV强毒 YS1株 ,随后我们采用静水压和 BEI灭活病毒的方法对该株强毒进行灭活 ,研制出两种新型的犬冠状病毒灭活苗 ,并对犬进行了免疫试验 ,同时我们还应用反转录 -聚合酶链反应( RT- PCR)技术对免疫后犬组织中的犬冠状病毒进行检测 ,并设立了传统的犬冠状病毒福尔马林灭活苗免疫犬… 相似文献
4.
根据GenBank中已发表的CAV纤突基因序列,设计合成4对8条引物,用已建立的PCR方法,对犬2型腺病毒沈阳分离株第5代强毒经蚀斑克隆驯化的第60代毒弱毒(SY-V60)和犬1型腺病毒长春犬株(CCC-V6)的纤突基因进行了扩增,PCR产物经纯化后进行基因序列测定,测定结果经拼接后得到一个由1632和1629个核苷酸组成的纤突蛋白全基因序列,分别编码543和542个氨基酸。犬2型腺病毒(SY-V60)与犬1型腺病毒(CCC-V6)的纤突基因的同源性达到80.48%。犬2型腺病毒(SY-V60)与犬1型腺病毒(CCC-V6)纤突基因的同源性达到80.48%;根据犬的腺病毒与人2型腺病毒纤突蛋白的序列同源性比较结果,推测了犬腺病毒纤突蛋白的尾(tail)、轴(shaft),结(knob)三个功能区的氨基酸序列,2个型之间的尾区同源性为76.9%;轴区同源性为78.59%;其结区同源性为83.24%,而同型毒株之间结和尾区同源性较高,轴区同源性较低。 相似文献
5.
应用YCA18株第8代细胞培养物(YCA18-8)经口鼻和静脉接种犬腺(CAV)SN本<1:2的易感犬作安全试验,结果未见任何CAV临床症状与病理解剖学改变;用不同剂量的YCA18-8分组免疫CAV易感犬,经SN抗体测定与用CAV强毒攻击试验,结果SN抗体达1:16以上的犬95%以上可获得免疫保护,最低免疫量为10^4TCID50;应用YCA18-8分别免疫母源抗体达1:4和1:8的两组试验犬,第一次免疫14d后SN抗体均未有升高,追加2-3次免疫后SN抗体才逐渐上升至1:16以上的免疫保护水平;用CAV易感犬和MDCK分别将YCA18连续传8代和20代,结果对犬仍然安全,对犬的免疫原性未见下降,最低免疫量仍为10^4TCID50;与CDV和CPV弱毒作免疫互扰试验,结果与各弱毒的单独免疫结果未见差异;将YCA18-8冰冻保存于一30℃,6个月内TCID50仍不低于10^-4/0.1ml,经加明胶-蔗糖低温真空冻干后,4℃和-30℃保存1年,TCID50均仍维持在10^-4/0.1ml以上,经YCA18-20 3次免疫的试验犬,1年后SN抗体仍在最低抗体保护值1:16以上。 相似文献
6.
狂犬病毒(RV)糖蛋白(G)、尾随序列、聚合酶、G-L间隔区决定了其神经侵袭力,并且G基因、G-L间隔区携带病毒遗传差异性及流行病学信息.为研究云南省RV的分子差异和进化关系、探索同一毒株不同基因片段是否发生重组,本研究选择云南省2006年~2011年来自不同地州的18份RV阳性样品,对G基因、G-L间隔区进行克隆、测序,并与参考序列进行比对及系统发育分析.实验表明云南RV血清Ⅰ型和基因Ⅰ型病毒株存在2个遗传谱系(China-Ⅰ和Thailand),其中China-Ⅰ可进一步划分为3个遗传亚谱系(China Ⅰ-1~China Ⅰ-3).3个病毒样品(YNYL2010、YNQJ07、YNRL022011)G基因、G-L间隔区分析结果存在差异,在G基因系统发育分析中,YNYL2010、YNQJ07、YNRL022011分别属于遗传亚谱系China Ⅰ-1、China Ⅰ-2、Thailand,而在G-L间隔区分析中,则分别位于China Ⅰ-2、China Ⅰ-3、China Ⅰ-1.结果表明云南省RV G基因和G-L间隔区基因序列具有遗传差异,相同遗传(亚)谱系的病毒株间可能存在不同的来源. 相似文献
7.
对昆明某犬场2例死亡犬的死亡原因进行实验室鉴定。采集犬肠内容物分别做细菌和病毒检测。细菌检测包括:犬肠内容物划线培养,纯化,分离,革兰氏染色,镜检,生化试验,血清试验,药敏试验。病毒检测包括:提取病料的总DNA,用犬细小病毒的特异引物进行PCR扩增,扩增产物经胶回收后克隆到pMD18-T载体,转化受体菌DH5α,挑取阳性克隆质粒进行序列测定,并与已知参考毒株序列进行比对,分析核苷酸的同源性。分离到一株有部分耐药性的侵袭性大肠埃希菌;检测到一株犬细小病毒,由引物P1/P2扩增的基因与参考毒株CPV-b同源性为98.58%,由引物P3/P4扩增的基因与参考毒株CPV-b同源性为92.1%。结果表明,2例死亡犬的死亡原因分别为侵袭性大肠埃希菌感染和犬细小病毒感染。 相似文献
8.
禽流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是病毒粒子表面抗原,是亚型划分的重要依据。从云南分离的H9N2亚型禽流感病毒感染鸡胚尿囊液中提取总RNA,采用特异性引物经RT-PCR分别扩增云南毒株10个HA和9个NA基因,纯化后克隆至pMD18-T载体,并对其进行测序。序列比对及系统发育分析结果表明:云南H9N2毒株HA基因核苷酸序列同源性为95.0%~99.7%;NA基因核苷酸序列同源性为86.2%~99.6%。在进化分枝中HA基因均属于欧亚分枝的类CBJ194亚分枝,与CBJ194的核苷酸序列同源性为92.0%~99.1%,NA基因属于CK/BJ/1/94和QaHKG1/97两个分枝。云南毒株HA裂解位点结构具有低致病性病毒分子特征;HA受体结合位点143、145、198和234位氨基酸存在变异,尤其234位氨基酸全部变为L,呈现了人流感受体结合特性。NA糖基化位点61~63、86~88部分毒株存在缺失,部分毒株在143~145位出现新的糖基化位点。 相似文献
9.
一种简便快速的体外点突变方法 总被引:1,自引:0,他引:1
体外点突变是研究蛋白质结构 -功能关系、基因表达、载体修饰等的重要技术之一。已报道的一些体外突变方法 [1~ 4 ] ,一般需以单链 DNA为模板 ,并要求对突变基因进行亚克隆和对单链 DNA拯救 ,技术上较复杂 ,多数需 1周以上时间。Stratagen公司研制的 Quickchange试剂盒 ,可以双链 DNA质粒为模板 ,只需 4步操作 ,在 1~ 2 d内即可完成点突变过程 [5] ,但该试剂盒价格昂贵 ,使用次数有限。我们根据 Pfu和 Dpn 等酶的特性 ,自行设计了突变反应及方法 ,对 6kb、8kb和1 4.6kb的目的质粒分别进行了点突变 ,成功地在质粒上创造了相应的酶切… 相似文献
10.