昆明滇池红嘴鸥源沙门氏菌的分离鉴定、耐药性及致病性分析

为了解昆明滇池红嘴鸥(Larus ridibundus)携带的沙门氏菌(Salmonellaspp.)的耐药性、毒力特征及致病性等情况,2019年11月,从昆明滇池随机选择100只越冬红嘴鸥,对其泄殖腔内容物进行细菌分离培养、生化鉴定、染色镜检、分子生物学鉴定、多位点序列分型和血清学鉴定;采用药敏纸片琼脂法对5大类14种抗菌药物进行耐药检测,使用PCR扩增检测耐药基因,分析耐药情况;通过毒力基因检测及动物致病性试验对所分离的细菌进行致病性分析。结果显示：确定其为ST19型鼠伤寒沙门氏菌(SalmonellaTyphimurium),抗原结构式为O抗原1, 4,[5], 12; H抗原i, 1, 2,主要对阿莫西林、环丙沙星、四环素和多西环素耐药,且检出四环素类耐药基因tetB,喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB、parC和psrE。该分离菌检测出mogA、sseL、mgtC、bcfA、araB、spvC、spvB、stn、fimA、orgA、sopB、sipB和spaN13种毒力基因。动物试验结果表明,该分离菌株对试验小鼠有一定致病性,接种浓度为5×10⁶、 5×...     

高速逆流色谱分离黄连生物碱及其抑菌活性初探

为了研究黄连生物碱的抑菌活性,采用高速逆流色谱(HSCCC)法分离黄连生物碱,K-B法检测其抑菌活性,测其对敏感菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示：从黄连中分离出黄连碱、掌叶防己碱、小檗碱、表小檗碱,提取率分别为44.41%、36.72%、68.54%、18.33%;对金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为10.00、29.50、21.00和12.50 mm;对无乳链球菌分别为11.40、27.50、14.00和15.50 mm;对粪肠球菌、大肠杆菌O157等均无效;黄连碱、表小檗碱对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的MIC和MBC均分别为136.36、272.73μg/mL;小檗碱对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为62.18、136.36μg/mL,对无乳链球菌的MIC和MBC分别为136.36、272.73μg/mL;掌叶防己碱对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的MIC和MBC均分别为62.18、136.36μg/mL。结果表明：用HSCCC制备生物碱,省时、方便,4种生物碱对金黄色葡萄球菌和无乳链球菌作用明显,对其余试验菌无效。     

红嘴鸥TLR7蛋白多克隆抗体制备及在DF-1细胞中的表达特征分析

【目的】制备红嘴鸥Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)蛋白多克隆抗体,分析红嘴鸥TLR7蛋白在DF-1细胞中的表达特征,为深入了解红嘴鸥TLR7蛋白功能及作用机制提供材料。【方法】设计引物扩增红嘴鸥TLR7基因CDS区,并构建其原核表达载体与真核表达载体。将重组原核表达质粒pET32a-TLR7转化大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞进行重组蛋白体外诱导表达,并对其诱导温度、诱导时间和IPTG浓度进行优化筛选。选用新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法检测血清抗体价效,利用Western blotting鉴定抗体特异性。将真核表达质粒pcDNA3.1-TLR7转染至DF-1细胞中过表达,利用间接免疫荧光技术检测红嘴鸥TLR7蛋白在转染DF-1细胞后不同时间点的表达特征。【结果】红嘴鸥TLR7基因CDS区长约1 182 bp,双酶切结果显示出2组大小不同的2条片段,分别为5 900、1 182 bp(原核表达载体)和5 428和1 182 bp(真核表达载体),测序后表明原核表达载体与真核表达载体构建成功。体外诱导温度为30℃、IPT...     

姜厚朴中和厚朴酚的提取及抑菌效果研究

为了分离姜厚朴中的单体化合物和厚朴酚,并探究其抑菌效果,试验采用高效液相色谱筛选色谱条件,以保留时间、色谱图及标准曲线进行分离物的定性和定量分析;对提取得到的和厚朴酚运用K-B纸片法对9种微生物进行抑菌圈直径的测定,将筛选得到的对和厚朴酚敏感的菌株用微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)。结果表明：以60%乙醇为最佳提取溶剂,以乙酸乙酯-石油醚(5∶5,V∶V)为最佳萃取条件,甲醇-0.5%甲酸水(80∶20,V∶V)等度洗脱为最佳色谱收集条件。结合保留时间和色谱图,确定收集物为和厚朴酚单体化合物,绘制的标准曲线方程为Y=1.15×10⁷X+5.91×10⁴,R²=0.998,线性范围为0.001 6～1 mg/mL,计算得到收集的和厚朴酚单体化合物纯度为85.1%。药效学评价和厚朴酚对大肠杆菌、溶血性大肠杆菌、沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肺炎克雷伯菌无抑制作用,对粪肠球菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用,抑制圈直径分别为(15.00±0.16)mm、(17.00±0.20)...