不同激活方法对小鼠卵母细胞孤雌发育及二倍体形成的影响

卵母细胞的孤雌激活是研究哺乳动物受精机制和发育机理的有效方法,也是细胞核移植、显微注射受精技术、孤雌胚胎干细胞等研究内容中的重要环节。本试验分别用乙醇、SrCl2、钙离子载体A23187对小鼠卵母细胞进行单独孤雌激活,并分别与6-DMAP联合运用,对小鼠卵母细胞进行联合孤雌激活。结果显示：（1）不同激活剂单独或联合激活,对卵母细胞的激活率有显著影响（P〈0.05）,SrCl2组的激活率最高（92%～94%）;（2）相同激活剂对卵母细胞孤雌囊胚的发育率在单独激活组（SrCl2组,18%）和联合激活组（SrCl2＋6-DMA组,53%）中存在显著差异（P〈0.05）;（3）相同激活剂对卵母细胞二倍体率在单独激活组（钙离子载体A23187组,21%）和联合激活组（钙离子载体A23187＋6-DMA组,77%）中均存在显著差异（P〈0.05）。结果表明：（1）SrCl2可以对小鼠卵母细胞进行有效的孤雌激活;（2）联合激活法可以显著提高孤雌卵母细胞的囊胚发育率;3、6-DMAP可以抑制第二极体排出,显著提高孤雌激活卵母细胞的二倍体率。     

小鼠脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞的诱导分化研究

为了通过特定转录因子将小鼠脂肪间充质干细胞(mADSCs)定向诱导分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)。本研究分别构建Pdx1(胰十二指肠同源盒基因1)、MafA(V-maf肌肉腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A)、NeuroD1(神经分化因子1)3种基因的慢病毒过表达载体,使用293T细胞对3种因子进行慢病毒包装,将3种慢病毒过表达载体以单因子侵染、双因子侵染、三因子联合侵染的方式对mADSCs进行定向分化诱导,于诱导分化第15天对不同方式诱导的IPCs进行检测鉴定,并对不同方式诱导组的IPCs进行高糖刺激,刺激后30~120min检测培养基中含糖量的变化。结果显示,构建的慢病毒过表达载体pHBLV-CMV-IRES-ZsGreen-Pdx1、pHBLV-CMV-PGK-RFPMafA、pHBLV-CMV-PGK-RFP-NeuroD1所含目的片段基因序列与小鼠全基因编码序列完全一致,三种基因慢病毒过表达载体构建成功;诱导分化第15天,三因子联合诱导组所形成的IPCs克隆双硫腙(DTZ)染色呈阳性,并可表达胰岛素生物合成及分泌相关基因;在高糖刺激条件下,三因子联合诱导组糖分解速度、分解量远优于单因子或双因子诱导组。结果表明,Pdx1、MafA、NeuroD1 3种因子联合作用,可以将小鼠脂肪间充质干细胞定向诱导分化为胰岛素分泌细胞,并可在高糖刺激下,有效发挥降糖作用。