犬瘟热的微生物学诊断研究

对临床诊断为犬瘟热的１４例病犬，取其脑组织，运用细胞培养、合胞体检查、包涵体检查、免疫荧光试验、电镜观察等５种检测方法，就犬瘟热的微生物学诊断进行了系统的研究。结果表明，犬脑组织块与猫胚（ＦＥ）细胞或非洲绿猴肾（Ｖｅｒｏ）细胞共同培养，盲传的培养物出现不稳定的细胞病变，通过对不同代次的培养物检查包涵体，并作超薄切片或负染，电镜观察犬瘟热病毒（ＣＤＶ）粒子，证实分离到ＣＤＶ野毒。病犬脑组织切片经ＨＥ染色检查包涵体及用ＣＤＶ荧光抗体直接法检测脑抹片及接种犬脑的细胞培养物，均获得一定的阳性结果。建立的改良离子捕获电镜法，用于检测犬脑匀浆和犬脑接种细胞培养物，与离子捕获电镜法、免疫电镜法及直接电镜法相比，效果更为理想。１４例临床诊断为犬瘟热的病犬，综合运用上述微生物学手段检测，结果为１２例阳性，２例疑似。     

犬瘟热病毒及新近发现的相关病毒

犬瘟热病毒（CDV）与新近发现的海豹瘟病毒1型（PDV－1）和海豹瘟病毒2型（PDV一2）这三种病毒均属于副粘病毒科麻疹病毒属的成员．病原特性极为相似。人们发现犬瘟热病毒至少已有两个世纪（Jenner，1809），而PDV－1，PDV－2则是近些年才报道的。1988年丹麦和西北欧的海豹群暴发了传染病，引起港湾海豹（PhocaVitulina）及发海豹的大批死亡”’，据研究确是其病原为PDV－1。次年，海豹瘟又在前苏联的贝加尔湖流行起来，病原为PDV一2。这两种类型的海豹瘟临床症状及病理变化极象犬瘟热，海豹感染后体内也出现CDV中和抗体。这三种…     

“猪病学”的教学改革初探

“猪病学”是兽医专业的一门重要专业选修课，是研究猪病发生和发展规律及预防、控制与消灭方法的科学，在兽医临床中有重要的实用价值。改革开放以来，一方面，我国养猪业生产结构发生了明显变化，以集约化为主体的多种规模养殖成为当今的主体；另一方面，随着科学技术的突飞猛进，许多新的技术应用大大丰富了本学科的内涵，电子显微镜、     

2型猪链球菌的血清学鉴定

本试验首次证实了２型猪链球菌在我国的存在，采用玻片凝集、琼脂扩散及毛细管沉淀等３项试验，对１９９０年以来广东某猪场断奶仔猪暴发流行的败血症、脑膜炎及关节炎病猪中分离的１５株链球菌进行了血清学鉴定。结果表明：１５株链球菌均为２型猪链球菌；用高压法提取抗原进行沉淀反应，其结果比酸热法提取抗原具有简便、敏感、特异性强的特点。     

表达Omp1和Omp2的猪大肠埃希菌融合菌株R2的构建

为了构建猪大肠埃希菌融合菌株,在药敏试验和MIC试验的基础上,对猪大肠埃希菌HY2株(O101,Omp1)和GXA1株(O107,Omp2)进行交叉耐药培育.以HY2(O101,Omp1,Amir,Czls)和GXA1(O107,Omp2,Czlr,Amis)为亲本菌株,采用溶菌酶-EDTA法制备两亲本菌株原生质体,通过聚乙二醇(PEG)助融,进行原生质体融合,得到3株双耐药融合菌株.结果表明,猪大肠埃希菌原生质体制备和再生的最适条件是:溶菌酶浓度为200 U/mL,作用时间为25 min.筛选得到3株融合菌株R1、R2、R3,均可凝集两亲本的O抗原,其中,R2凝集性更好更稳定.进一步结合SDS-PAGE分析,显示融合菌株R2能较好的表达两亲本菌株形状,经多次传代仍能够稳定遗传.     

牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

根据GenBankTM中发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物,以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度约500 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上.酶切、PCR及序列测定结果表明,获得了牛IL-15全长基因的克隆.进一步通过PCR方法得到缺失其N端48个氨基酸的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a上,构建重组表达质粒pET-IL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,该菌表达以包涵体形式存在的相对分子质量约为33 000的融合蛋白.用Ni螯合层析方法纯化表达的蛋白.Western-blot试验显示表达的重组融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应,同时也能与鼠抗猪IL-15的多克隆抗体发生明显交叉反应.     

猪α-干扰素基因的分子克隆和序列分析

应用PCR技术从猪肝组织中扩增获得一条约500 bp的特异带,回收后连接到pMD18-T载体中,转化DH5α,酶切鉴定和并进行测序分析.结果表明,成功克隆获得猪-干扰素(INF-α)基因,501bp,编码166个氨基酸,与GenBank上序列号为M28623及X57191的序列相似性分别为96.6%和96.4%,氨基酸的相似性为91.6%.     

环状抗菌肽cyclopsychotride在毕赤酵母X -33中的表达及其活性鉴定

为提高重组外源蛋白在毕赤酵母中的高效表达,试验采用毕赤酵母(Pichia pastoris)偏嗜性密码子改变抗菌肽cyclopsychotride的碱基序列,通过SOEing法合成后连接到pPICZα -C质粒上,从而获得分泌型重组酵母表达载体pPICZα -C- cyclopsychotride,再通过限制性内切酶B...     

当前猪病毒性腹泻流行特点与防控建议

一、流行病学(一)流行特点近年来,严重的猪病毒性腹泻主要发生在泰国、日本、韩国及我国等亚洲养猪国家,主要病原为猪流行性腹泻病(PED),而猪传染性胃肠炎(TGE)和猪轮状病毒(RV)较少见。偶尔有三个病原同时出现,或两个组合,多以PED为主。该病主要发生于冬春寒冷潮湿季节,但近年来个别猪场处理不当时可一年四季反复发生。我国PED流行毒株基因有所变异,毒力有所增强。防控     

鸭瘟病毒及其核酸的电镜观察

对鸭瘟病毒及共核酸进行了电镜观察。纯化病毒经核酸酶降解杂核酸后，加入８５ｍｏｌ／Ｌ的尿素释放病毒核酸，经水相法展开后用碳膜铜网点样，再经染色和真空喷镀，于电镜下观察。鸭温病毒呈典型的疱疹病毒形状，其核酸分子量估算约为９１１×１０６道尔顿。