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为了构建表达猪圆环病毒2型(PCV-2)Cap蛋白和猪细小病毒1型(PPV-1)VP2蛋白的重组伪狂犬病病毒(PRV)及鉴定其免疫原性,试验采用经典同源重组技术构建重组病毒,利用密码子优化的VP2基因(VP2_(opti))和含PRV gG蛋白信号肽序列的VP2_(opti)基因分别构建重组质粒pMD18T-LR(TK)-VP2_(opti)和pMD18T-LR(TK)-VP2_(opti)(SP)。用已构建的重组病毒rPRV-TK~-/gE~-/gG~-/3Cap~+为骨架,以EGFP为标签经同源重组获得重组病毒。采用IPMA法鉴定Cap蛋白和VP2蛋白抗原在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达,采用IFA法鉴定VP2蛋白在重组病毒感染的PK-15细胞中的表达与定位。用这2株重组病毒免疫小鼠,通过检测血清中PRV、PCV-2和PPV-1抗体水平对构建的重组病毒在小鼠体内的免疫原性进行评价。结果表明:经同源重组获得重组病毒rPRV-TK~-/VP2~+/gE~-/gG~-/2Cap~+和rPRV-TK~-/VP2~+(SP)/gE~-/gG~-/2Cap~+;在重组病毒感染的PK-15细胞中均能检测到阳性Cap蛋白和VP2蛋白抗原;重组病毒rPRV-TK~-/VP2~+/gE~-/gG~-/2Cap~+表达的VP2蛋白定位于细胞浆和细胞核,而重组病毒rPRV-TK~-/VP2~+(SP)/gE~-/gG~-/2Cap~+表达的VP2蛋白定位于细胞浆;用这2株重组病毒免疫小鼠能够检测到PRV中和抗体;用灭活的重组病毒免疫小鼠后可产生低水平的Cap和VP2抗体,而重组病毒活毒免疫的小鼠未检测到相应抗体。说明这2株重组病毒在体外能够表达Cap蛋白和VP2蛋白,PRV gG蛋白信号肽序列的加入促进了VP2蛋白从细胞核的释放。 相似文献
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为确定某规模化猪场引发呼吸道症状的病原，继而制定科学的防治方案，对采集的血清和肺脏样品进行常见呼吸道病原的抗体和抗原检测以及细菌的分离和分型鉴定，并对分离菌株进行药敏试验。病毒抗体检测结果显示，猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体阳性率为60.0%(45/75)，猪圆环病毒2型（PCV2）抗体阳性率为98.67%(74/75)，猪瘟（CSFV）抗体阳性率为97.33%(73/75)。病毒核酸检测结果显示，PRRSV阳性率为36.0%(9/25),PCV2和CSFV均为阴性。细菌分离鉴定结果显示，培养的细菌符合副猪嗜血杆菌（HPS）和猪链球菌（SS）的形态特征。病原分型鉴定结果显示：感染病原为高致病性PRRSV(HP-PRRSV)和NADC30-like PRRSV;HPS为血清12型，SS为血清9型。药敏试验结果显示，HPS对多西环素、头孢曲松、头孢噻呋较为敏感，SS对青霉素、头孢曲松、头孢噻呋、头孢氨苄较为敏感。结果表明，该猪场疫情由HPPRRSV和NADC30-like PRRSV毒株及HPS-12型和SS-9型混合感染所致。因该猪场免疫的PRRSV CH-1R经典毒株疫苗与分... 相似文献
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