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旨在探究旋毛虫肌幼虫体内是否存在鸟氨酸依赖型抗酸系统，本研究根据GenBank中Ts-ODC全序列基因组设计三条特异性siRNA分子，采用脂质体浸染转染的方法将其分别转染至旋毛虫肌幼虫体内，使用qPCR、Western blot和间接免疫荧光试验，筛选最佳干扰siRNA分子及最佳干扰条件；并在pH 1.5、2.5、4.5和6.6的条件下将肌幼虫分别培养0.5、1和2 h,从肌幼虫Ts-ODC基因转录水平、酶活性及存活率等方面分析Ts-ODC基因干扰对旋毛虫肌幼虫抗酸能力的影响；将Ts-ODC基因被干扰的旋毛虫肌幼虫感染小鼠，在7和42 d时分别收集成虫和肌幼虫，分别计算其减虫率；将子一代肌幼虫在pH 2.5的酸性条件下培养2 h,计算其存活率，对Ts-ODC基因干扰的遗传性进行分析。结果显示，Ts-ODC siRNA-757为最佳干扰分子，转染12 h、浓度为2μmol·L-1培养3 d时为最佳干扰条件；各组pH 2.5培养2 h时Ts-ODC基因转录水平最高，pH 1.5培养2 h时虫体的存活率明显低于其他培养条件(P<0.01),pH 4.5培养0.5 ... 相似文献
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为探究旋毛虫体内是否存在鸟氨酸依赖性抗酸系统(AR5)及旋毛虫鸟氨酸脱羧酶(TsODC)对旋毛虫抗酸能力的调控作用，本实验分别采用p H1.5、p H2.5、p H4.5、p H6.6的培养液以及PBS (pH7.4)作为对照组分别培养0.5 h、1 h和2 h后，通过统计旋毛虫肌幼虫的存活率、采用荧光定量PCR (qPCR)和western blot，分别筛选旋毛虫肌幼虫体外最适酸处理条件。结果显示，在酸度为p H2.5培养2 h时，肌幼虫的存活率为51%(此时死亡数与存活数基本相等)及Ts ODC基因的转录和表达水平最高。因此，p H2.5培养2 h为旋毛虫肌幼虫体外最佳酸处理条件。于培养液中分别添加不同浓度的精氨酸、Ts ODC多抗血清、姜黄素和雷帕霉素，以PBS作为对照组分别培养12 h、24 h和48 h后，采用上述最佳酸处理条件处理后，通过计算肌幼虫存活率，采用q PCR检测Ts ODC基因的转录水平并初步筛选不同制剂的最佳培养浓度及时间，并在各最佳浓度和时间培养后，再经最佳酸处理条件处理，采用western blot检测Ts ODC蛋白的表达，分析各制剂对旋毛虫抗酸能力的... 相似文献
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