屠宰猪猪肺炎支原体P36、P46、P97 R1、P146氨基酸序列的差异分析

为了解猪肺炎支原体流行菌株遗传变异情况,选取2014-2017年不同时间、地点收集的17头猪肺炎支原体阳性屠宰猪肺脏灌洗液DNA为模板,进行猪肺炎支原体P36(编码具有强免疫原性的胞浆蛋白)、P46(编码具有强免疫原性的表面蛋白)、P97 R1区、P146高变区(猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的重要功能区域)基因的PCR扩增、测序。结合GenBank登录的猪肺炎支原体相关序列进行氨基酸序列的比对分析。结果表明,比对的序列之间,P36、P46蛋白氨基酸序列同源性均在98.9%以上,但P97功能区R1区、P146多变区在菌株间存在较大差异。11个屠宰猪样本和5个GenBank登录菌株P97 R1区重复氨基酸序列数量达到14个以上,而GenBank登录的3个疫苗相关菌株(168株、168-L株、J株)及另外4个菌株、4个屠宰猪样本重复序列为9～11个不等;P146高变区氨基酸序列的差异主要集中在2个重复氨基酸序列区(R1、R2),GenBank登录的168株、168-L株、J株以及另外2个菌株,1个屠宰猪样本在R1区出现较多氨基酸缺失。168株、168-L株,6个屠宰猪样本及另外3个GenBank登录菌株在R2区出现了3～9个不等的氨基酸缺失。利用DNAStar进行抗原表位预测发现,菌株间P97 R1、P146 R1、P146 R2区氨基酸序列的差异,导致了抗原表位出现明显的变化。提示开展P97、P146等黏附因子的筛选和研究或许能进一步提升疫苗阻止猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的作用,从而进一步改善疫苗的免疫效果。     

猪萨佩罗病毒间接免疫荧光方法的建立与初步应用

以分离的猪萨佩罗病毒PSV Hu N1/2016株感染PK15细胞,制备抗原板,建立检测猪血清中PSV抗体的间接免疫荧光(IFA)方法。结果表明:一抗最佳稀释浓度为1∶300;FITC标记的羊抗猪荧光二抗最佳稀释浓度为1∶300。该方法特异性强,敏感度高,既能将PSV抗体与PRRSV、FMDV、PCV、CSFV抗体区分开,也可以检测到中和效价0.128的阳性血清。用该方法检测湖南省部分规模化猪场208份临床血清样品的总阳性率为68%,表明PSV在湖南省流行普遍,且其感染主要发生在保育阶段。     

猪圆环病毒2型Rep蛋白ELISA抗体检测方法的建立

为建立一种快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)抗体的方法,本研究通过基因合成PCV2的Rep编码序列,将其克隆至pET-28a(+)并在E.coli中表达,表达的重组Rep蛋白经Ni2+亲和纯化.采用纯化的目的蛋白作为包被抗原,建立检测PCV2 Rep蛋白抗体的间接ELISA方法.结果表明最佳抗原包被浓度为200 ng/孔,血清和二抗最佳反应时间分别为1h和30 min.该方法具有良好的特异性和敏感性,与韩国金诺公司试剂盒的符合率为81.4％,表明建立的ELISA方法可以用于PCV2的流行病学检测.     

母猪流行性腹泻返饲后免疫应答评估

当前,猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行广、危害严重。除进行疫苗免疫工作外,返饲常常做为猪场控制猪流行性腹泻的重要手段。笔者用6头育肥后期猪模拟母猪返饲(攻毒)实验,研究母猪返饲后排毒情况与血清抗体消长变化,来探究母猪返饲最佳时机以及如何避免返饲带来的风险。结果表明,试验猪在返饲后第2、3天相继发生腹泻并检测到PEDV,在返饲后11 d猪血清中IgG抗体明显上升,并在攻毒后第20天IgA与IgG检测值均达到峰值,在攻毒后第15天唾液与粪便均检测不到病毒。说明,生产上在产前15 d到30 d之间返饲效果较好,病毒感染仔猪的风险最低。为临床防控该病提供理论依据。     

成年种公猪圆环病毒2型血清抗体的检测结果初报

猪圆环病毒2型(PCV-2)引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的重要病因,该病多发生于1-2月龄的仔猪,主要侵害猪体的免疫系统,从而有利于其他病毒和细菌的继发感染,使死亡率明显升高,给养猪业造成巨大的经济损失.     

对兽医传染病诊断教学实习课程改革的探讨

兽医传染病诊断实践是一门实践性很强的动物医学类专业实习课程,教学方法对实习效果有较大影响。针对目前教学实习过程中存在教学实习体系不健全,实验室诊断与临床诊断脱节,甚至没有临床诊断的问题,笔者提出了与养殖企业合作建立远程辅助教学实习平台,与兽医第三方检测机构合作开发新的实习基地,以及人为"造病",模拟真实的发病状态的三点解决方案。新的教学实习办法将更加适合现在的养殖新模式和教学新形式,从而使学生能够更加全面地学习和掌握兽医传染病诊断方法。     

猪圆环病毒2抗体水平的监测及意义

猪圆环病毒2（Porcinecircovims2,PCV2）与猪群中发生的许多疾病密切相关,诸如断奶仔猪多系统衰竭综合症（Postweaningmultisystemwastingsyndrome,PMWS）、猪皮炎肾炎综合症（Porcinedermatitisandnephropathysyndrome,PDNS）、母猪繁殖障碍、增生性肠炎、仔猪先天性震颤、猪呼吸道病复合症等,其中以PMWS最为常见,PMWS主要引起猪渐进性消瘦、腹泻、呼吸道症状、皮肤苍白或出现黄疸、生产性能降低。     

猪繁殖与呼吸综合征未免疫猪群的抗体消长规律研究

为研究未免疫猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的猪场的PRRSV抗体消长规律,试验采集A、B、C三个规模化猪场共147头猪的血液样本,分离血清,用IDEXX试剂盒检测血清中的PRRSV抗体。检测结果表明A、B、C三个猪场的猪群具有相似的PRRSV抗体消长规律,即哺乳仔猪体内存在PRRSV抗体,随着猪周龄的增长,PRRSV抗体水平降低,PRRSV抗体水平下降到最低后,随着PRRSV的感染,机体产生免疫应答,PRRSV抗体水平快速上升。可为猪场制定合理的PRRSV疫苗免疫程序提供指导。     

抗红斑丹毒丝菌的rSpaA蛋白猪源单链抗体库构建及单链抗体淘选

从免疫过rSpaA的猪的脾淋巴细胞中提取总RNA,采用RT–PCR技术反转录合成cDNA。设计兼并引物扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸PCR方法,将VH和VL通过Linker连接成重组单链抗体(以下简写为sc Fv)的基因片段。将sc Fv的基因连接至噬菌粒载体p Comb3Xss,将重组载体电转化至宿主菌XL1-Blue,并经辅助噬菌体M13KO7拯救,获得猪源噬菌体单链抗体库,库容约为2.5×106。以rSpaA为靶抗原,经免疫亲和筛选,获得8株特异性较好的阳性克隆。本研究结果可为制备抗红斑丹毒丝菌的重组sc Fv提供新途径,并为猪丹毒的免疫检测和综合防制提供材料基础。     

猪巨细胞病毒gB蛋白抗原表位富集区的表达和抗原性的分析

为表达猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因,本研究根据GenBank登录的PCMV gB基因序列设计1对引物,以感染PCMV猪肺细胞总DNA为模板,采用PCR扩增得到gB基因片段,克隆于pMD-18T并进行核苷酸序列测定。利用DNAStar分析gB蛋白的抗原表位,选择抗原表位富集的2个基因片段(命名为PCMVgB1和PCMVgB2)分别克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒并转化Rosetta(DE3)宿主菌。结果显示:扩增的gB基因与GenBank登录的PCMV gB基因的核苷酸同源性在97.6%～98.9%之间,推导的氨基酸同源性在97%～98.6%之间。经IPTG诱导的含pET-gB1和pET-gB2重组质粒的宿主菌可表达重组gB1和gB2蛋白,SDS-PAGE显示分子量约为62ku和36ku。Western blot和间接ELISA结果表明,重组gB1和gB2蛋白均具有反应原性。